谢　旖，周　煜，黄卫梅，田亚南，文利新，邬　静

(湖南农业大学 动物医学院，湖南长沙 410128)



猪孕烷X受体基因真核表达载体的构建与表达

谢旖，周煜，黄卫梅，田亚南*，文利新，邬静

(湖南农业大学 动物医学院，湖南长沙 410128)

摘要：为构建猪的孕烷X受体(PXR)基因真核表达质粒，用RT-PCR技术从新鲜猪肝中扩增到猪孕烷X受体(pgPXR)基因，将其连接到真核表达载体pCI-neo 中，得到重组质粒pCI-pgPXR。对该重组质粒进行PCR、测序及酶切鉴定后，采用脂质体法将其转染到人肝癌细胞HepG2细胞，用RT-PCR和双荧光素酶检测系统进行鉴定。结果表明，猪孕烷X受体基因真核表达质粒pCI-pgPXR构建成功，可在HepG2细胞中表达，为猪孕烷X受体的药理学和毒理学研究奠定了基础。

关键词：孕烷X受体；质粒构建；真核表达

孕烷X受体(pregnane X receptor，PXR)为核受体超家族NRl Ⅰ亚家族成员，由Kliewer S A等[1]于1998年首次发现。PXR是一类配体依赖型转录因子，通过与位于某些基因上游的特异性PXR反应元件结合而调控基因表达[2-3]。

PXR的配体结合域(ligand binding domain,LBD)具有明显的种属差异，人和小鼠的LBD氨基酸序列仅80%相同，LBD序列的差异导致不同种属之间PXR配体激活的差异性。猪PXR(pgPXR)与人类PXR(hPXR)在蛋白序列上具有85%的同源性和95%的相似性，在配体结合上也具有较高的相似性，有研究发现pgPXR能被hPXR激动剂利福平(Rif)和贯叶金丝桃素激活，这表明猪可能是研究人类药物学和毒理学的最适当模型[4-5]。PXR与配体结合后能高效地参与调控异生代谢，在生理和病理过程中也起着重要作用，如炎症反应[6-7]。本试验旨在构建pgPXR的真核表达质粒并通过荧光素酶检测系统鉴定基因在真核细胞中的表达情况，为pgPXR的研究及其激活剂的高通量筛选奠定基础。……