邬　琴，闫圆圆，王　振，梁淋渊，郑婷婷，孔科委，王熙楚，周　霞

(石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000)



绵羊脑炎单增李斯特菌生物膜形成及相关基因的检测

邬琴，闫圆圆，王振，梁淋渊，郑婷婷，孔科委，王熙楚，周霞*

(石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832000)

摘要：为了检测绵羊脑炎李斯特菌生物膜形成情况并确定生物膜形成相关基因在该菌中的分布情况，采用结晶紫染色结合测定OD值的方法观察羊脑炎李斯特菌生物膜在不同时间段形成情况,并应用分子生物学方法检测生物膜形成相关基因(flaA、recA、relA、prfA、yneA、agrA、luxS、degU、motB、sigB、hpt)在该菌中的分布情况。结果表明，在37 ℃，绵羊脑炎李斯特菌生物膜在2 h～8 h的OD值与0 h和对照组对比差异显著(P<0.05)， 9 h～48 h OD值呈平稳趋势，与对照组比较差异显著(P<0.05)。2 h开始生物膜初具形态，呈现散落的网格结构，2 h～6 h矩阵网格结构明显，6 h～8 h形成高度有序的网格结构，9 h～48 h依然具备生物膜网状结构特征，但个别网状结构脱落。11种生物膜相关基因在绵羊脑炎李斯特菌中的检测结果为阳性，测序结果与GenBank公布的相应序列同源性为87.22%～99.29%。结果表明2 h～6 h生物膜进入黏附期和生长期，6 h～8 h进入成熟稳定阶段，9 h～48 h逐渐进入播散期；LM90携带11种与生物膜形成相关的基因。

关键词：绵羊脑炎李斯特菌；生物膜；膜相关基因

李斯特菌病(Listeriosis)是由单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes,LM)引起的一种具有重要公共卫生意义的动物源性和食源性人畜共患病，该病发病率低,但病死率高。在兽医临床中可引起绵羊的“转圈病”。细菌生物膜(bacterial biofilm,BBF)是指细菌为了适应生存环境，包裹于细胞外多聚物基质中的黏附于非生物或生物表面的微生物群落[1-2]。胞外多糖是细菌生物膜的主要组成部分和结构支架，可为细菌生长提供营养，并对细菌的黏附、聚集、成膜等发挥重要作用，亦可增强细菌对宿主免疫系统和外界环境的抵抗力[3-4]。近年来，随着对细菌耐药机制的研究，发现微生物生物膜与细菌的耐药性密切相关。以生物膜形式存在的细菌，对抗生素的抗性会提高10倍～1 000倍，是造成当前细菌感染加重的主要原因之一[5-6]。……