刘誉 杨泽民

摘 要：为探索体外促进原代皮肤成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞的培养条件及原代皮肤成纤维细胞转分化前后两种状态下经肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）刺激，其MMP基因的表达情况。利用Wistar大鼠真皮分离出的原代成纤维细胞为模型，分别以高密度与低密度将细胞培养于塑料界面，通过Western Blot和qRT-PCR检测肌成纤维细胞的标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达量；同时经TNF-α刺激后，利用qRT-PCR和明膠酶谱检测高密度与低密度两种状态下MMP-9和MMP-13的表达及两种状态下MMP-9的活性。发现大鼠真皮中分离出的原代成纤维细胞在低密度培养条件下，可以有效地转分化为肌成纤维细胞，其标志物α-SMA显著上调；经肿瘤坏死因子刺激a，成纤维细胞在低密度培养条件下MMP-9和MMP-13对TNF-α刺激的响应程度较高密度培养时显著降低。初步表明在大鼠真皮（dermis）中，原代成纤维细胞体外转分化为肌成纤维细胞且MMP-9和MMP-13在肌成纤维细胞中下调的现象是细胞密度依赖型。

关键词：基质金属蛋白酶；原代成纤维细胞；密度培养；转分化；肿瘤坏死因子

文献标志码：A 文章编号：1674-5124（2016）09-0055-06

0 引 言

基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）是一类锌离子依赖的肽链内切酶，属于金属蛋白酶家族。目前已发现至少20种MMPs，按照作用底物可分为明胶酶、胶原酶、基质溶解酶和膜型基质金属蛋白酶[1]。MMPs在结构上具有较高的同源性，大多数MMPs都包括前肽结构域、催化结构域和信号结构域等；其中，在MMPs的催化活性中心均发现Zn2+的存在[2]。

MMPs的表达具有细胞、组织特异性，其调控主要发生在转录水平、表观遗传学水平以及转录后水平[3]。……