席红军，张师红,李炳义

(陕西省渭南市第二医院 泌尿外科,陕西 渭南714000)

0 引言

Akt蛋白也称作蛋白激酶B(PKB)，是一种丝氨酸特异性蛋白激酶，在多种细胞信号通路中发挥重要的作用，包括调控细胞存活、细胞凋亡、细胞增殖、转录和细胞迁移[1-3].研究表明，Akt蛋白在PI3K/AKT/mTOR等分子通路中[4]起关键性作用，并且通过磷酸化(p-Akt)和灭活特定蛋白，比如Bad，forkhead转录因子(forkhead transcription factors)，以及c-Raf 和caspase-9促进细胞存活[5-7].热休克蛋白60( heat shock protein， HSP60)是一种线粒体分子伴侣，其功能是将细胞质中的蛋白质折叠转运到线粒体基质，在细胞的免疫应答中起着重要作用[8]，在受到外界刺激后，迅速调节细胞免疫应答抵御各种侵袭.Tina[9]等人研究发现,HSP60能够激活细胞外信号相关激酶ERK-1/2、JNK、p38、NF-κB以及损伤性胰岛素诱导的磷酸化Akt.活性氧(ROS)能够攻击细胞的遗传物质DNA，并可能对其增殖生长造成一定的影响.在此研究中，使用 H2O2对前列腺癌细胞PC3进行刺激，来研究HSP60的促炎症或抗炎症反应中是否对Akt蛋白的表达造成一定的影响，进而激活PI3K/AKT/mTOR，对细胞的存活形成一定的保护作用.

1 材料和方法

1.1 抗体及试剂

H2O2，Sigma公司；噻唑蓝(MTT)及二甲基亚砜(DMSO)，Sigma公司；HSP60，Stressgen公司；Akt以及磷酸化Akt，Cell signaling公司；GAPDH，Ambion公司；辣根过氧化物二抗，BD公司.

1.2 主要仪器

倒置显微镜，Nikon公司；二氧化碳培养箱，美国Thermo公司；SDS电泳仪器以及电转移，Bio-rad公司；台式高速低温离心机，美国Beckman 公司；DG-3022A 型酶标仪，美国Biotek 公司.

1.3 MTT法检测细胞存活率

接种200 μL 3×104个·mL-1细胞于96 孔平底培养板上，37 ℃、5%CO2培养72 h.加入H2O2与完全培养基混合液处理细胞，设置9组不同摩尔浓度的H2O2，见表1，每组设8 个平行孔……