陈　璇，刘　松，冯　岳，堵国成*，陈　坚

（1.江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122；2.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡214122）

常压室温等离子诱变选育L-天冬酰胺酶高产重组菌

陈璇1，2，刘松1，2，冯岳1，2，堵国成1，2*，陈坚1，2

（1.江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214122；2.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡214122）

以Bacillus subtilis WB600为宿主，构建了能分泌表达L-ASNase的重组菌，并通过常压室温等离子体诱变进一步提高了重组菌的产酶量。重组Bacillus subtilis WB600（pMA5-wapA-ansZ）发酵30 h，胞外酶活达到37.2 U/mL，表明L-ASNase在信号肽wapA介导下能分泌至胞外。在功率120 W、气流量10 L/min、诱变时间40 s的诱变操作条件下，对重组菌进行了等离子体诱变。突变株的酶活最高达48.4 U/mL，较诱变前提高30%。上述结果表明，常压室温等离子体诱变能有效提高重组菌产L-ASNase的酶活.研究结果为L-ASNase的工业化生产提供了高效的生产菌株。

L-天冬酰胺酶；枯草芽孢杆菌；异源表达；常压室温等离子体诱变

L-ASNase（Asparaginase，EC3.5.1.1），是一种酰胺基水解酶，能催化天冬酰胺水解生成天冬氨酸和氨。在临床上，L-ASNase常与其他药物联合用于治疗急性淋巴细胞白血病（ALL）及某些淋巴瘤与肥大细胞瘤等癌症［1-4］。此外，L-ASNase能有效分解致癌物质丙烯酰的前体天冬酰胺，使之成为欧美国家在食品安领域中近期关注的热点酶种之一。Jia等［5］人的研究中，添加L-ASNase处理的土豆切片高温油炸后丙烯酰胺的含量减少了82%。Kukurova等［6］人在小麦面粉中添加L-ASNase，丙烯酰胺的含量减少了90%。因此，实现L-ASNase的高效生产是国内外研究的热点。

ASNase广泛存在于微生物中，包括欧文氏杆菌（Erwinia carotovora），产……