孔祥鹏　刘志华　刘雪峰　刁桂萍

(东北林业大学，哈尔滨，150040)



棘孢木霉ACCC30536葡聚糖酶基因的克隆及表达1)

孔祥鹏刘志华刘雪峰刁桂萍

(东北林业大学，哈尔滨，150040)

摘要以棘孢木霉(Trichoderma asperellum)ACCC30536菌株为试材，采用聚合酶链式反应(PCR)技术克隆获得葡聚糖酶GH71基因的全长cDNA序列。结果表明：此基因的cDNA 编码区序列全长1 296 bp，编码区可编码431个氨基酸。经BlastP相似性分析，其属于GH99～GH71超家族，与深绿木霉(T. atroviride)氨基酸序列XP_013941146的同源性最高，达到94%。7种不同诱导条件下，GH71基因的表达量变化明显。在2种病原菌细胞壁的诱导下，GH71基因的表达均呈先上升后下降又上升的趋势，在培养的12 h时达到最大值，分别为未诱导时的24.3倍和23.9倍。而在这2种病原菌发酵液的诱导下，GH71基因的表达均呈先下降后上升的趋势。在山新杨茎与叶的诱导下，GH71基因的表达量在24 h最大，分别为未诱导的25.4倍和25.2倍；在山新杨根的诱导下，GH71基因的表达量在48 h达到最大，是未诱导的28.1倍。

关键词棘孢木霉；葡聚糖酶；诱导表达

木霉菌(Trichodermaspp.)因其能抑制多种病原真菌、促进植物生长、诱导其免疫能力，且兼具降解土壤中盐类化合物、农药残留物及重金属离子等功能，而被广泛应用于农林业中[1-2]。经研究发现，木霉菌中含有种类丰富的葡聚糖酶，包括α-1,3葡聚糖酶、β-1,3葡聚糖酶和β-1,6葡聚糖酶[3]。这些葡聚糖酶是木霉产生的非常重要的抑菌蛋白之一，它们通过与其它酶类或是抗生素的协同作用起到抑菌的功效。有研究表明，绿色木霉(Trichoderma virens)中的β-1,3葡聚糖酶TvBgn2和β-1,6葡聚糖酶TvBgn3，能提高木霉对多种病原真菌的拮抗能力[4-5]。……