徐彦召，王　青，胡建和，余　娟，陈仕均

(河南科技学院 动物科学学院，河南 新乡 453003)



利用CMV启动子构建PRRSV感染性克隆的研究

徐彦召，王青，胡建和，余娟，陈仕均

(河南科技学院 动物科学学院，河南 新乡 453003)

[摘要]【目的】 建立一种利用CMV启动子获得拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法，为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒提供操作平台。【方法】 根据PRRSV的基因序列特征和CMV启动子的序列特征，对pBluescprict Ⅱ SK(+)载体进行多克隆序列改造；设计特异性引物，分6段扩增、组装出PRRSV的全长cDNA并扩增CMV真核启动子序列；采用酶切、连接、转化等方法将连接成功病毒的全长cDNA置于CMV真核启动子序列的下游，获得含有CMV启动子和猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1A株全长cDNA克隆的重组质粒pSK-CH-1A；再将重组质粒直接转染MARC-145宿主细胞，得到猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1A株病毒的拯救病毒。【结果】 成功获得了19 112 bp含CH-1A全长cDNA的pSK-CH-1A载体，将其直接转染MARC-145宿主细胞后，经细胞体内转录合成病毒基因组RNA，获得了拯救病毒(rCH-1A)；病毒生长特性试验结果显示，拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性，且拯救病毒序列含有不同于亲本病毒的分子标记MluⅠ酶切位点。【结论】 建立了一种方法简单，操作方便，节约时间和成本的PRRSV感染性cDNA克隆的体外拯救方法。

[关键词]猪繁殖与呼吸综合征病毒；CMV启动子；感染性克隆

猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)是目前危害世界养猪业的重要传染病病原之一，该病毒属于套式病毒目(Nidovirale)，动脉炎病毒科(Arteriviridae)，动脉炎病毒属(Arterivirus)。研究者通过对PRRSV全基因组序列分析，将其分成2种基因型，即欧洲型(genotype Ⅰ)和美洲型(genotypeⅡ)，我国的流行毒株(包括高致病性PRRSV)为美洲型[1-2]。……