胡湘云，高小龙，付向晶，王燕平，刘丹丹，常旭东，刘　蓬，杜恩岐，王兴龙，党如意，杨增岐

(西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌712100)



新城疫病毒HN蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

胡湘云，高小龙，付向晶，王燕平，刘丹丹，常旭东，刘蓬，杜恩岐，王兴龙，党如意，杨增岐

(西北农林科技大学 动物医学院，陕西 杨凌712100)

[摘要]【目的】 应用酵母双杂交技术构建新城疫病毒的血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白线性中和表位区的诱饵载体pGBKT7-HN-neu，为筛选靶向新城疫病毒HN蛋白的中和性纳米抗体奠定基础。【方法】 合成HN蛋白的线性中和表位区HN-neu，将其克隆至酵母双杂交系统诱饵载体pGBKT7中，构建诱饵载体pGBKT7-HN-neu，经酶切鉴定和测序验证正确后，将pGBKT7-HN-neu转化酵母菌Y2H Gold，检测其在酵母细胞中的毒性和自激活作用。【结果】 成功合成了HN-neu，构建的pGBKT7-HN-neu在酵母细胞Y2H Gold中无毒性和自激活能力。【结论】 成功构建了诱饵载体pGBKT7-HN-neu。

[关键词]新城疫病毒；HN蛋白；酵母双杂交系统；诱饵载体

新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的一种禽类急性、高度接触性、致死性传染病，在世界范围内广泛流行，是危害养禽业的主要传染病之一[1]。NDV 属于副粘病毒科禽腮腺炎病毒属，为单股负链 RNA 病毒[2]。NDV基因组包含 6个开放阅读框架(ORF)，编码6种结构蛋白，分别为核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素-神经氨酸酶(HN)和大蛋白(L)，其编码基因排列顺序是 3′-NP-P-M-F-HN-L-5′，其中HN是位于NDV病毒粒子表面囊膜上的一种纤突蛋白，是病毒进入宿主细胞的必需成分之一[3]。HN具有血凝素和神经氨酸酶2种活性，能诱导机体产生中和性抗体，在机体抗感染免疫中起着重要作用，尤其是其中和表位是免疫保护作用的核心靶点，是研究和控制新城疫的最佳切入点[4]。……