刘　静，韩　丽，李任峰，徐　萍，鲁　毅，杨　猛，王三虎

(河南科技学院 动物科学学院，河南 新乡 453003)



来航鸡FOXL2基因的真核表达及纯化

刘静，韩丽，李任峰，徐萍，鲁毅，杨猛，王三虎

(河南科技学院 动物科学学院，河南 新乡 453003)

[摘要]【目的】 对来航鸡FOXL2基因进行真核表达及纯化，为其生物学功能研究奠定基础。【方法】 根据GenBank已发表的来航鸡FOXL2基因序列(GenBank登录号：JF＿708868.1)设计引物，以来航鸡全血DNA为模板，PCR扩增FOXL2基因，经EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后定向克隆于pPICZαA 中，获得pPICZαA-FOXL2真核表达载体。将pPICZαA-FOXL2转化毕赤酵母菌GS115，用甲醇进行诱导表达，对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测。【结果】 克隆了918 bp的FOXL2基因；成功构建了pPICZαA-FOXL2真核表达载体；实现了FOXL2基因在毕赤酵母菌GS115中的融合表达，获得了分子质量约为37 ku的重组蛋白FOXL2，经Western blotting 检测其具有较好的生物学活性。【结论】 成功地在毕赤酵母中表达了来航鸡FOXL2基因。

[关键词]来航鸡；FOXL2基因；真核表达

叉头框转录因子L2基因(Winged helix forkhead transcription factor gene 2，FOXL2)存在于细胞核内，是一个长度为2.7 kb的单外显子基因，位于3q23(3号染色体2区3带)区域，包含一个特有的forkhead DNA结构域(该结构域含有101个氨基酸，位于第54-148残基区域之间)和一个多聚丙氨酸肽段，但该肽段的功能尚不确定。许多人类发育性、免疫性疾病及肿瘤的发生均与个体的基因突变有关，这些基因突变可引起循环系统、免疫系统和骨骼系统的缺陷。此外，FOXL2是最早被发现的一个在人类卵巢功能维持方面起重要作用的常染色体基因，也是在脊椎动物中首先被认定作为卵巢分化的性别二态性标记物[1]。FOXL2是单外显子转录因子，位于常染色体上，是卵巢分化过程中最早的影响因子，在不同性别决定机制的脊柱动物中呈现高度保守性和高表达性[2]。……