赵　娜，刘金霞，孙殿兴



反转录环介导等温扩增技术对丙型肝炎病毒可视化分型检测

赵娜1,2，刘金霞2，孙殿兴2

1.承德医学院病原生物学教研室，承德067000；2.中国人民解放军白求恩国际和平医院全军肝病诊治中心，石家庄050082

摘要：目的应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)可视化检测丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型，为RT-LAMP技术应用于现场或基层医院提供初步探索经验。方法首先，收集临床阳性样本并用荧光定量PCR分型检测，把样本基本分为1型和非1型。然后分别根据HCV 1b和2a基因型设计RT-LAMP引物并优化反应条件，通过互换模板实验验证这2套引物的特异性，并通过检测稀释的模板以验证引物的灵敏度。同时用钙黄绿素进行产物显色，使HCV分型检测可视化。最后用RT-LAMP方法检测临床样本，并计算阳性率，应用配对卡方检验比较RT-LAMP和荧光定量PCR的统计学差异。结果优化好的RT-LAMP体系的特异性好，对HCV 1b型的检测灵敏度为103 IU/mL，2a型的检测灵敏度为104 IU/mL。另外，利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相当。通过对临床样本分型检测，HCV 1b型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异无统计学意义(P>0.05)，HCV 2a型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异有统计学意义(P<0.05)，但是未检出的样本中有2例为HCV 2b型。结论RT-LAMP对HCV的可视化分型检测具有较好的特异性和灵敏度，操作简便，具有在现场或基层医院的应用前景。

关键词：丙型肝炎病毒(HCV)；反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)；分型检测

Supported by the Medicine and Hygiene Research Foundation of the PLA (No. CBJ14C010)

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)是仅次于乙型肝炎病毒引起慢性肝炎的主要病原体，如果不进行正确治疗，将有相当比例的患者会发展为肝硬化甚至肝癌。根据HCV序列之间超过30%的差异，可将HCV主要分为6个基因型，每一型又可细分为不同的亚型。H……