杨万勇　陈波　阮富旺

【摘要】 目的 明确鼻咽癌肿瘤干细胞基因表达图谱， 为进一步探索鼻咽癌肿瘤干细胞的生物学特性打下基础。方法 采用芯片技术检测鼻咽癌肿瘤干细胞CNE-2S的微小RNA（miRNAs）、 长链非编码RNA（lncRNAs）和信使RNA（mRNAs）表达， 与其母细胞CNE-2相比较， 寻找其差异。结果 与CNE-2相比， CNE-2S中表达miRNAs上升2倍43个， 下降54个；lncRNAs上升757个， 下降3034个；mRNAs上升1088 个， 下降2265个。结论 鼻咽癌肿瘤干细胞CNE-2S与其母细胞CNE-2相比， miRNAs、 lncRNAs和mRNAs表达差异较为显著， 提示其具体不同的生物学活性。

【关键词】 鼻咽癌；肿瘤干细胞；微小RNA；长链非编码RNA；信使RNA

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.17.194

Analysis of expression profile of miRNAs， lncRNAs and mRNAs in nasopharynx cancer tumor stem cell YANG Wan-yong， CHEN Bo， RUAN Fu-wang. Dongguan City Guanghua Hospital， Donggaun 523416， China

【Abstract】 Objective To clarify expression profile of nasopharynx cancer tumor stem cell gene， and to provide reference for further research of biological characteristics in nasopharynx cancer tumor stem cell. Methods Chip technology was applied to detect expression of micro RNA （miRNAs）， long non-coding RNA （lncRNAs） and messenger RNA （mRNAs） in nasopharynx cancer tumor stem cell CNE-2S， comparing with their metrocyte CNE-2. Results Comparing with CNE-2， CNE-2S contained 43 miRNAs with 2 times increase and 54 decrease； 757 increased lncRNAs and 3034 decrease； 1088 increased mRNAs and 2265 decrease. Conclusion Comparing with metrocyte CNE-2， nasopharynx cancer tumor stem cell CNE-2S contains more remarkable expression of miRNAs， lncRNAs and mRNAs， which reveals their different biological activity.

【Key words】 Nasopharynx cancer； Tumor stem cell； Micro RNA； Long non-coding RNA； Messenger RNA

复发和高转移是鼻咽患者生存率无法上升的主要原因[1]， 肿瘤干细胞假说为鼻咽癌的复发提供了可能的解释[2， 3]。本研究拟采用芯片技术比较CNE-2S与CNE-2之间的miRNAs、 lncRNAs和mRNAs的表达差异， 明确CNE-2S的生物学功能， 为揭示鼻咽癌复发和转移的分子机制提供帮助。

1 材料与方法

1. 1 实验材料 鼻咽癌低分化细胞株CNE-2[4]由本课题组保存， 鼻咽癌肿瘤干细胞CNE-2S[3]由本课题组构建。Total RNA 提取试剂TRIzol （Invitrogen公司）， Human miRNA Microarray， Release 18.0， 8×60K芯片（Agilent公司）， 晶芯? lncRNA+mRNA 表达谱芯片 （博奥公司）。

1. 2 实验方法

1. 2. 1 总核糖核酸（RNA）的提取和质检 采用Trizol法提取组织或细胞样品的总RNA， 用分光光度计定量， 甲醛变性胶电泳质检total RNA的质量。

1. 2. 2 芯片检测 总RNA的纯化、标记、反转录及芯片检测等实验委托生物芯片北京国家工程研究中心完成。

1. 2. 3 数据提取及芯片结果分析以Cluster 3.0软件进行聚类分析。

2 结果

2. 1 芯片结果的聚类分析 以Cluster 3.0 软件对芯片结果进行聚类分析， 相对CNE-2、CNE-2S在miRNAs、lncRNAs和mRNAs的表达图谱上均有较大差异， 说明二者的基因表达及调控方式有较大不同。……