韩瑜++张久磊++王芳++屈小媛++秦华军++贾强

摘要：为了确定山银花药材的适宜采收期，对山银花药材不同产地、不同部位、不同时期的主要药用成分的积累分布规律进行了研究。高效液相色谱法测定采集于不同产地山银花药材花蕾中绿原酸、川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙的含量，以及同一产地山银花药材不同部位、不同时期绿原酸、川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙的含量。结果发现，采自绥阳小关的山银花药材的绿原酸含量最高；同一产地山银花药材的花与叶中绿原酸的含量相对较高，花中含量最高；盛花期比花蕾期中绿原酸含量高。以上结果表明，产地对山银花药材的质量有影响，山银花的花与叶均可作为药用部位，盛花期为最佳采收期。

关键词：山银花；绿原酸；川续断皂苷乙；灰毡毛忍冬皂苷乙；分布规律

中图分类号： S184；S567.7+90.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）06-0294-02

收稿日期：2015-05-07

基金项目：贵州省中药现代化重大专项[编号：黔科合重大专项字（2012）6010号]。

作者简介：韩瑜（1984—），女，贵州贵阳人，硕士，助理研究员，主要从事中药资源利用及药用成分分析研究。E-mail：1070530803@qq.com。

通信作者：贾强，博士，研究员，主要从事植物化学及药理学研究。E-mail：42540816@qq.com。山银花（Lonicerae flos）为忍冬科植物L. macranthoides Hand.-Mazz.、L. hypoglauca Miq.、L. confusa DC. 或L. fulvotomentosa Hsu et S.C. Cheng的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开放前采收、干燥[1]。山银花具有抗氧化、抗过敏、抗病原微生物、抗炎退热和免疫调节等药理作用[2-3]。在中医上，证实其具有清热解毒、疏散风热之功效，主要用于治疗风热感冒和喉痹丹毒等症[1，4]，为我国常用药材之一。在民间，山银花也被称为“金银花”，为“银翘解毒丸片”、“维生素C银翘片”等多种中成药的主要原料。最近几年，还广泛应用于食品、化妆品和保健品等方面，具有很大的市场潜力，因此有广阔的种植前景。山银花在我国西南3省、两广地区、湖南、海南等省区都有广泛分布[5]。山银花的主要活性成分有绿原酸、黄酮类和三萜类[6-7]。近些年来，在山银花中又发现了20多个皂苷类成分[3]，其中陈君等从灰毡毛忍冬花蕾中分离得到了8个皂苷类成分[8]。作为山银花主要有效成分的绿原酸，与该植物的药用价值和临床疗效是紧密相关的[9]。目前，山银花的质量评价主要是由绿原酸含量决定[10]。《中国药典》2010年版一部规定：“本品按干燥品计算，含绿原酸（C16H18O9）不得少于2.0%，含灰毡毛忍冬皂苷乙（C65H106O32）和川续断皂苷乙（C53H86O22）的总量不得少于5.0%[1]。”

本研究通过对贵州不同产区的灰毡毛忍冬植物和在同一产区、不同部位、不同时期的灰毡毛忍冬植物的主要活性成分含量进行测定，研究山银花药材植株在1个生长周期内主要药用成分的积累与分布规律，以确定其适宜采收期。研究结果将为贵州山银花药材规范化栽培和采收提供理论依据，同时也为贵州中药材山银花的发展提供一定的技术支撑。

1材料与方法

1.1样品采集

2014年4月分别在黔南平塘、凤岗药材基地、湄潭县黄家坝、清镇、施秉、绥阳小关采集了山银花药材植株样本，同期采集绥阳小关山银花药材花、叶、枝植株样本。经贵阳中医学院魏升华教授鉴定，所采样本为忍冬科植物灰毡毛忍冬L. macranthoides Hand.-Mazz.。具体采集方案见表1和表2。

1.2仪器与试剂

HP1100 HPLC；Xtimate TM C18 4.6 mm×250 mm，4.5 μm色谱柱；绿原酸标准品（中国生物制品检定所）、川续断皂苷乙标准品（中国生物制品检定所）、灰毡毛忍冬皂苷乙标准品（中国生物制品检定所）；乙腈（色谱纯）、甲醇（分析纯）、乙酸（分析纯）、去离子水。

1.3标准品溶液的制备

分别取上述3种标准品适量，精确称量，加50%甲醇制成每1 mL含绿原酸0.5 mg、 川续断皂苷乙0.2 mg、灰毡毛忍冬皂苷乙0.6 mg的混合溶液。

1.4样品溶液的制备

取本品粉末（过4号筛）约0.5 g，精确称量，置具塞锥形瓶中，加入50 mL 50%甲醇，称定质量，超声处理（功率 300 W，频率40 kHz）40 min，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液，即得样品溶液。

1.5色谱条件

HP1100 HPLC；Xtimate TM C18 4.6 mm×250 mm，4.5 μm色谱柱；以乙腈为流动相A，以0.4%乙酸溶液为流动相B，按规定进行梯度洗脱（表3）；流速：1.0 mL/min；检测波长：VWD 330 nm；柱温：25 ℃；进样量：5 μL。

1.6测定法

分别吸取2、10 μL标准品溶液，5～10 μL样品溶液，注入HPLC，检测，用外标法计算绿原酸的含量，采用同法对数方程计算灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量。

2结果与分析

2.1不同产地山银花中绿原酸、川续断皂苷乙、灰毡毛忍冬皂苷乙的含量测定

不同产地的山银花花蕾中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量存在较大差异（表4）。在6个地区采集的样品中绿原酸含量介于1.139%～3.501%之间，黔南平塘采集的样品绿原酸含量最低，而绥阳小关采集的样品绿原酸含量最高；川续断皂苷乙含量介于0.217%～1.609%之间，凤岗药材基地采集的样品川续断皂苷乙含量最低，而清镇采集的样品绿原酸含量最高；灰毡毛忍冬皂苷乙含量介于 5.47%～8.4%之间，施秉采集的样品灰毡毛忍冬皂苷乙含量最高，而黔南平塘采集的样品灰毡毛忍冬皂苷乙含量最低。以上结果表明，产地对山银花品质有很大影响。表4中样品完全按《中国药典》2010年版一部方法处理和测定。6个产地的样品中只有产自于梅潭县黄家坝、清镇、施秉和绥阳小关的山银花药材中绿原酸含量符合《中国药典》规定的不少于2.0%的限量。川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙的总含量最高值是在清镇采集的样品，为 9.729%，最低值是在凤岗药材基地采集的样品，为5.787%，平均值为7.828%；6个产地的样品均符合《中国药典》规定的川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙的总量不得少于 5.0% 的限量。

2.2同一产地山银花不同部位、不同时期绿原酸、川续断皂苷乙、灰毡毛忍冬皂苷乙的含量测定

表5中样品完全按《中国药典》2010年版一部方法处理和测定。根据测试结果可看到，在山银花药材花的部分绿原酸含量较高值是在盛花期采集的样品，为2.92%，而较低值是在花蕾期采集的样品，为2.36%，平均值为2.64%，所有样品均符合《中国药典》规定的不得少于2.0%的限量；而川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙的总含量较高值是在花蕾期采集的样品，为8.03%，较低值是在盛花期采集的样品，为458%，平均值为6.305%；只有花蕾期的样品符合《中国药典》规定的川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙的总量不得少于 5.0% 的限量。在山银花药材叶的部分绿原酸含量较高值是在盛花期采集的样品，为2.90%，而较低值是在花蕾期采集的样品，为2.14%，平均值为2.52%，所有样品均符合《中国药典》规定的限量；而川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙的总含量较高值是在盛花期采集的样品，为1.36%，较低值是在花蕾期采集的样品，为1.27%，平均值为1.315%；所有样品均低于《中国药典》规定的限量。在山银花药材枝的部分绿原酸含量较高值是在盛花期采集的样品，为0.51%，而较低值是在花蕾期采集的样品，为0.33%，平均值为0.42%，所有样品均低于《中国药典》规定的限量；而川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙的总含量较高值是在盛花期采集的样品，为 1.82%，较低值是在花蕾期采集的样品，为0.78%，平均值为1.3%；所有样品均低于《中国药典》规定的限量。

3讨论与结论

山银花药材中这3种活性成分的含量随着采集地点的不同而发生波动，体现了地区因素对于药材质量的影响。此外，灰毡毛忍冬皂苷乙的含量普遍要比同地区样品中的川续断皂苷乙的含量高；而作为山银花药材质量评价研究的主要成分绿原酸的含量最高值出现在采自绥阳小关产区的样品中，因此，为了研究山银花药材中绿原酸的积累与分布规律，笔者把

采自绥阳小关产区不同时期、不同部位的样品作为研究对象进行分析。

花与叶中绿原酸的含量相对较高，花中含量最高，而叶中的含量也较高；在花中川续断皂苷乙和灰毡毛忍冬皂苷乙的总含量较高，而在叶与枝中二者总含量较低，故综合考虑花与叶均可作为用药部位；而花与叶中绿原酸含量在盛花期都比花蕾期高，可考虑将盛花期作为最佳采收期。

综上所述，本试验对不同产区山银花药材的主要药用成分绿原酸、川续断皂苷乙、灰毡毛忍冬皂苷乙的含量进行了测定，说明了不同产区是造成其药用成分含量差异的影响因素之一。因此，对不同产区主要药用成分的累积和分布规律的研究是很有必要的。与此同时，对同一产区山银花不同部位、不同时期绿原酸的积累与分布规律的研究表明，不同部位和不同时期，主要药用成分的含量也有较大差异，所以通过此项研究能更准确地确定药用部位和最佳的采收期。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M]. 北京：化学工业出版社，2005：28.

[2]王芳，高松. 金银花、山银花药理学研究现状[J]. 辽宁中医药大学学报，2013，15（4）：237-239.

[3]李锦燊，吴洪文. 山银花化学成分与药理活性研究进展[J]. 北方药学，2014，11（2）：71-73.

[4]广东省植物研究所.海南植物志：第三卷[M]. 北京：科学出版社，1974：14-19.

[5]李静，孙雪林，陈少容，等. 山银花繁殖技术研究进展[J]. 广西农学报，2014，29（4）：40-43，55.

[6]石钺，石任兵，陆蕴如. 我国药用金银花资源、化学成分及药理研究进展[J]. 中国药学杂志，1999，34（11）：724-727.

[7]贾晓东，赵兴增，王鸣，等. 灰毡毛忍冬化学成分研究[J]. 中药材，2008，31（7）：988-990.

[8]陈君，许小方，柴兴云，等. 灰毡毛忍冬花蕾的化学成分[J]. 中国天然药物，2006，4（5）：347-351.

[9]Gao J M，Zhang A L，Zhang K J，et al. Advances in the researches of distribution，extraction and bioactivities of chlorogenic acids[J]. Journal of Northwest Forestry University，1999，14（2）：73-82.

[10]张倩茹，周旭美，荆晶，等. 遵义小关山银花的质量评价[J]. 光谱实验室，2012，29（5）：2707-2712.