王锐丽,叶兆伟,薛业敏

(1.信阳农林学院 生物与制药工程学院，河南 信阳 464000； 2.南京师范大学 金陵女子学院，江苏 南京 210097)

重组酶Xar的表达纯化及性质研究

王锐丽1,叶兆伟1,薛业敏2

(1.信阳农林学院 生物与制药工程学院，河南 信阳 464000； 2.南京师范大学 金陵女子学院，江苏 南京 210097)

为获得高效的半纤维素类饲料酶制剂，将含嗜热厌氧乙醇菌α-阿拉伯糖苷酶/木糖苷酶(Xar)基因的重组质粒pET-20b-xar导入大肠杆菌DH10B中，经IPTG诱导进行高效表达，将表达的重组酶进行热处理和Ni2+亲和层析纯化，并对纯化的重组酶Xar的性质进行研究。结果表明，以对硝基苯酚-α-阿拉伯呋喃糖苷(pNPAF)为底物，重组酶Xar的最适反应温度和最适pH值分别是75～80 ℃和6.0，米氏常数(Km)、最大反应速度(Vmax)分别为2.42 mmol/L、20.7 μmol/(min·mg)；以对硝基苯酚-β-木糖苷(pNPX)为底物，重组酶Xar的最适反应温度和最适pH值分别为93 ℃和5.8～6.2，Km、Vmax值分别为0.60 mmol/L、43.8 μmol/(min·mg)。将重组酶Xar置于80 ℃保温1 h，木糖苷酶的相对活性仍为56.4%，在pH值4.2～8.2条件下仍保持较高的稳定性。当木糖浓度达到400 mmol/L时，木糖苷酶的相对活性仍有97.9%。Mn2+对重组酶Xar有明显的激活作用，而Cu2+和Zn2+对其有明显的抑制作用。可见，重组酶Xar具有良好的热稳定性。

木糖苷酶； 耐热性； 纯化； 酶学性质

我国是农业大国，秸秆和玉米芯等是畜牧业植物性饲料的主要来源。反刍动物由于瘤胃中微生物体系可以分泌功能各异的酶，对秸秆和玉米芯的利用率可达到60%～80%，但单胃动物对秸秆和玉米芯的利用率很低[1-2]。在生产中通常将多种半纤维素酶，如β-1,4-木聚糖酶、β-甘露聚糖酶、β-木糖苷酶和α-L-阿拉伯糖苷酶等制成复合酶，作为饲料酶制剂添加到饲料中，以降低饲料中多糖的黏度，促进动物肠道对蛋白质、脂肪的消化吸收，提高饲料的利用率，进而减少饲料的投放量，降低成本。……