靳芹

摘要：细胞培养是病毒学实验研究必不可少的重要工具和手段。本文以猪乙型脑炎病毒在猪肾上皮细胞（PK-15细胞）增殖培养为例，介绍一下病毒的细胞培养方法，和一些注意事项。

关键词：细胞培养；PK-15细胞

随着畜牧业的高速发展，养殖规模的不断扩大，动物疫病也成为困扰广大养殖户的首要问题。检测出明确的疫病类型，是做好养殖业防控治疗的关键。对发病毒株的更深一步的研究，可有助于研制适于当前流行疫病的疫苗和药物制剂。这样，病毒前期的分离培养就尤为重要，因为病毒缺乏完整的酶系统，又无核糖体等细胞器，所以不能在任何无生命的培养液内生长。试验动物、鸡胚以及体外培养的组织细胞就成为人工增殖的基本工具。细胞培养与实验动物和鸡胚相比，不仅经济、方便、省时、省力，而且能提供大量生物性稳定的细胞群体，降低了外界因素的影响，使实验结果更加准确可靠。

1病毒组织细胞培养方法

1.1细胞培养所需仪器设备

干燥箱、恒温培养箱、普通冰箱、-80℃低温冰柜、高压消毒器、恒温水浴箱、普通离心机、真空泵、蔡氏滤器、显微镜、无菌室、超净工作台、细胞培养瓶、移液管（1mL、5mL、10mL）等。

1.2病毒培养过程所需溶液的配制

1.2.1营养液的配制营养液是组织细胞中赖以生长和增殖的直接环境，不仅要求含有多种营养物质，而且必须保证适宜酸碱度、温度、渗透压和气相等。以配制10mL营养液为例：需灭菌蒸馏水7.8mL、EME0.9mL、双抗（青霉素和链霉素）0.2mL、犊牛血清1mL、Na 0.1mL，调PH值7.2-7.4。……