陈明非 刘威 李巍

养殖场饮用水质量直接关系到畜禽健康及生产水平。养殖场饮用水受到微生物污染会引起畜禽肠道疾病反复发作。养殖场饮用水受到微生物污染的途径很多：浅井水和地表水易受畜禽粪便污染；供水塔、贮水池及输水管道长期不清洗会造成微生物滋生；饮水线中残留有药物载体（淀粉、葡萄糖等）会成为细菌长期滋生的基质。养殖场应该定期检测饮用水的微生物指标，为开展饮水系统的清洁与消毒工作提供依据。

人的饮用水微生物指标由专业机构检测，依据GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》，动物饮用水和人的饮用水微生物指标最好一致，但是养殖场饮用水易受污染，尤其是饮水线末端的水，因此养殖场饮用水微生物检测需求多，频繁送水到专业机构检测既不现实又不经济。笔者多次对养殖场饮用水进行微生物检测，总结出一套简便易行的检测方法，检测结果与GB/T5750.12-2006的标准方法有很好的一致性，适于在养殖场或基层畜牧兽医实验室推广应用。

1实验原理

1.1评价指标

评价水质清洁度有三个重要指标：菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群。总大肠菌群指自然环境中的大肠菌群，用提高培养温度的方法可以将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，因此耐热大肠菌群的检出是水质被粪便污染的标志。

1.2指标限值

养殖场贮水池、水塔、饮水线入口三处水质的微生物学指标是：菌落总数

2实验方法

2.1水样采集

分别采集供水塔或蓄水池，饮水线入口，饮水线末端三处的水样，装入灭菌容器中。

2.2实验器材

2.2.1仪器设备高压蒸汽灭菌器，干热灭菌箱，恒温培养箱（2台），水浴锅，天平，菌落计数器。

2.2.2实验耗材试管，平皿，吸管、三角烧杯、玻璃瓶等，耗材使用前要干热灭菌。

2.3培养基

营养琼脂，双料乳糖蛋白胨培养液（常规乳糖蛋白胨培养液除蒸馏水外其他成份加倍），伊红美蓝培养基，这些培养基可以使用市售的成品，也可以按下面方法自制：

营养琼脂：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1000 mL，这些成分混合后，水浴加热溶解，调整PH值为7.4-7.6，121℃高压灭菌20 min。

双料乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨20g，牛肉膏6g，乳糖10g，氯化钠10g，溴甲酚紫乙醇溶液（16g/L）2mL，蒸馏水1000mL，先将蛋白胨、牛肉膏、乳糖和氯化钠溶于蒸馏水中，调整PH值为7.2-7.4，再加入2mL的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒立小试管的大试管中，每管10mL，115℃高压灭菌20min。

伊红美蓝培养基：蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氢二钾2g，琼脂25g，蒸馏水1000mL，伊红水溶液（20g/L）20mL，美蓝水溶液（5g/L）13mL，将蛋白胨，磷酸氢二钾和琼脂溶解于蒸馏水中，调整PH值为7.2-7.4，加入乳糖，115℃高压灭菌20 min，冷却至50℃左右加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。

2.4接种与培养

2.4.1水样稀释先充分混匀水样，无菌操作吸取1mL水样注入9mL灭菌生理盐水中，混匀成1：10稀释液，同法倍比稀释1：100、1：1000、1：104、1：105、1：106的稀释液。

2.4.2营养琼脂接种用灭菌吸管分别吸取1mL未稀释的水样和各稀释度的水样，注入不同的灭菌平皿中，然后倒入15mL左右已融化并冷却至45℃左右的营养琼脂，立即轻轻旋摇平皿将水样与培养基混匀，待培养基冷却凝固后放入湿盒中在37℃培养48h后进行菌落计数。

2.4.3双料乳糖蛋白胨培养液接种取10管双料乳糖蛋白胨培养液，每管无菌接种10mL未稀释的水样，接种后5管置于37℃培养24h，作为总大肠菌群检测，5管置于44.5℃培养24h，作为耐热大肠菌群检测。

2.4.4伊红美蓝琼脂接种取双料乳糖蛋白胨培养液产酸产气管（37℃或44.5℃培养，培养液变黄，倒立小试管浮起，内含气泡），用接种环蘸取少量培养液，在伊红美蓝琼脂上进行细菌划线分离接种，按接种的双料乳糖蛋白胨培养液的培养温度分别置于37℃或44.5℃培养24h。

3结果判定

3.1菌落总数判定

选择平均菌落数在30～300之间的培养皿进行计数，如果所有稀释度菌落数都>300，则计数最高稀释度平皿菌落数；如果所有稀释度的菌落数都<30，则计数最低稀释度平皿菌落数；如果所有稀释度平皿菌落数都不在30～300之间，则计数最接近30或300的平皿。计数后，再乘以稀释倍数，得出每毫升水样菌落总数（CFU/mL）。

3.2大肠菌群判定

观察37℃培养的双料乳糖蛋白胨培养液，产酸产气者为大肠菌群疑似阳性管，疑似阳性管经37℃伊红美蓝琼脂分离培养后观察有紫黑色或边缘浅紫红色中心紫黑色，略带金属光泽的特征菌落，证实为阳性管，根据阳性管数，按表1判定每100mL水样总大肠菌群最可能数（MPN/100mL）。

3.3耐热大肠菌群判定

观察44.5℃培养的双料乳糖蛋白胨培养液，产酸产气者为耐热大肠菌群疑似阳性管，疑似阳性管经44.5℃伊红美蓝琼脂分离培养后观察有3.2中描述的特征菌落，证实为阳性管，同样按表1判定每100mL水样耐热大肠菌群最可能数（MPN/100 mL）。

3.4结果

菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群三项指标低于1.2中的指标限值报告水样微生物检测合格，高于则报告不合格。

4总结

两年来，笔者定期对某种猪场、某种禽场进行饮用水微生物指标检测，指导两场合理进行饮水系统的清洗和消毒，种猪场仔猪黄白痢、种禽场禽腹泻病的发生率明显下降，同时减少了预防性投药。建议养殖场将饮用水微生物检测做为疫病综合防控措施之一开展起来。