张书文，王锟，韩圣谦

（烟台市产品质量监督检验所，烟台市质量认证咨询中心，山东烟台 264003）



超高效液相色谱-串联质谱法同时测定露酒中伐地那非、西地那非和他达拉非含量

张书文，王锟，韩圣谦

（烟台市产品质量监督检验所，烟台市质量认证咨询中心，山东烟台 264003）

摘要以甲醇提取样品，采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法同时测定露酒中西地那非、伐地那非和他达拉非。以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相，质谱采用电喷雾ESI+扫描模式，通过多反应监测模式进行定性及定量分析。伐地那非、西地那非和他达拉非的线性范围均为5～1 000 μg/L，检出限均为0.001 mg/kg，线性相关系数均大于0.999。实际样品中伐地那非、西地那非、他达拉非的加标回收率分别为91.0%～96.0%，92.0%～96.0%，89.5%～92.4%。测定结果的相对标准偏差均小于2%（n=6）。该方法操作简单、快捷，精密度、回收率高，适用于露酒中伐地那非、西地那非和他达拉非的含量分析。

关键词露酒；液相色谱串联质谱法；伐地那非；西地那非；他达拉非

作为治疗男性性功能障碍的处方药物，伐地那非、西地那非和他达拉非严禁在食品和保健食品中添加。这些药物具有一定的副作用，容易引起头痛、头晕、鼻塞和视觉障碍等症状，对于心血管疾病患者，甚至有可能造成突然死亡的后果。近年来，一些不法厂商在一些露酒产品中非法加入此类药物，以增强抗疲劳的功效，提高产品的竞争力。这种现象出现逐年上升的趋势，极易造成该类药物的滥用，对消费者的健康形成严重的威胁。由于生产工艺不规范，食品中药物的含量均匀性很难得到保障，在消费者不知情的情况下，会带来严重的副作用，进而造成严重的危害［1-6］。

目前，对保健食品中枸橼酸西地那非的检测有分光光度法［2］、薄层色谱法［3］、高效液相色谱法［4-7］、毛细管电泳法［8］、液相色谱-串联 质谱法［9-11］等。我国还没有用液相色谱串联质谱法测定露酒中这3种药物成分的相关标准。曾有高效液相色谱法测定露酒成分的报道［6］，但是由于保健食品成分较为复杂，定性和定量分析易受到干扰。为了消除干扰，笔者采用液相色谱-串联质谱的多反应监测（MRM）进行定量，分别采用液相色谱通过组分保留时间、一级质谱选择母离子、二级质谱选择两组子离子3种方式进行确证定性，为准确定性、定量奠定良好的基础。建立的超高效液相色谱-串联质谱法测定露酒中的伐地那非、西地那非和他达拉非的方法，具有快速、准确、灵敏度高的优点，可作为露酒产品中非法添加该3种药物的监测方法。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）仪：Quattro Premier XE型，配有电喷雾离子源，美国Waters公司；

分析天平：AL204型，感量为0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；

伐地那非、西地那非、他达拉非对照品：纯度均不小于98%，中国药品生物制品检定所；

乙腈、甲醇：色谱纯，德国默克集团；

实验所用其它试剂均为分析纯；

实验室用水为超纯水，用Millipore纯水机制得。

1.2 标准溶液配制

分别准确称取西地那非、他达拉非、伐地那非对照品各约0.1 mg，用甲醇溶解制成10 mg/L的标准储备液，于棕色玻璃小瓶内4℃下避光保存。临用时根据需要用甲醇稀释成适当浓度的混合标准溶液。

1.3 样品处理

准确移取试样5.00 mL至蒸发皿中，在水浴中缓慢蒸至近干，加入5 mL甲醇后超声萃取5 min，以4 000 r/min离心3 min，经0.22μm滤膜过滤后备用。

1.4 仪器工作条件

1.4.1 色谱条件

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（50 mm ×2.1 mm，1.7 μm）；流动相：甲醇-0.1%甲酸水溶液，流量为0.3 mL/min；柱温：30℃；进样体积：5 μL；梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序

1.4.2 质谱参数

离子源：电喷雾离子源（ESI），采用ESI+模式；扫描方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：3.5 kV；锥孔电压（Cone）：30 V；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：400℃；脱溶剂气流量：450 L/h；锥孔气流量：50 L/h；碰撞气流量：0.13 mL/min。

伐地那非、西地那非、他达拉非的保留时间、母离子、子离子、锥孔电压、碰撞电压和驻留时间列于表2。

表2 3化合物的保留时间、母离子、子离子等参数

2 结果与讨论

2.1 质谱条件的优化

首先采用1 mg/L的伐地那非、西地那非和他达那非标准溶液，在正离子模式下，通过仪器自动优化功能，得到最佳的质谱条件，母离子，定量离子和定性离子见表2。

2.2 色谱条件的优化

为使分离效果达到最佳，选择有利于离子化的流动相以使质谱的检测灵敏度达到最高。水相分别采用10 mmol/L 乙酸铵溶液、0.1%甲酸溶液、0.1%甲酸-10 mmol/L 乙酸铵溶液（50∶50），有机相分别采用甲醇-乙腈（50∶50）、甲醇、乙腈，进行梯度洗脱测试。结果表明，用1.4仪器工作条件，按表1的梯度洗脱程序，组分的色谱峰形和分离效果均较好。3种物质的MRM色谱图见图1。

图1 3种物质的总离子流图

2.3 样品提取方法的选择

露酒中含有大量糖类物质，糖类物质在甲醇中的溶解度较低，而伐地那非、西地那非和他达拉非均完全溶于甲醇。利用这个特点，通过对样品进行水浴蒸干，直接用甲醇溶解样品，有效地除去大量糖类物质的干扰，可以免于繁琐的净化步骤。既能有效提高回收率，又能大大降低检验成本，并且缩短检验时间，提高检测效率，方法便于推广使用。

2.4 线性方程和检出限

在1.4仪器工作条件下，对1.2系列混合标准工作溶液进行测定，以色谱峰面积Y对组分的质量浓度X进行线性回归，以3倍信噪比对应的含量定义方法检出限，伐地那非、西地那非和他达拉非的回归方程、线性范围、相关系数、检出限见表3。

表3 线性方程、线性范围、相关系数与检出限

2.5 精密度与加标回收试验

用本实验方法对6款露酒样品进行测定，样品中均未检出伐地那非、西地那非和他达拉非残留。在阴性样品中分别添加伐地那非、西地那非和他达拉非对照品0.1～0.5 mg/kg，进行加标回收试验，结果见表4。

表4 回收率与精密度试验结果（n=6）

由表4可知，伐地那非的回收率为91.0% ～96.0%，西地那非的回收率为92.0%～96.0%，他达拉非的回收率为89.5%～92.4%，测定结果的相对标准偏差均小于2%，表明所建立的分析方法的精密度和准确度均较高，满足检测要求。

3 结语

采用超高效液相色谱-串联质谱法测定露酒中的伐地那非、西地那非和他达拉非，利用水浴蒸干后用甲醇提取的方式进行样品处理。该方法能有效消除露酒中糖类物质的干扰，并且操作简便，准确度高，检出限低，稳定性好，检验周期短，可用于露酒中伐地那非、西地那非和他达拉非的同时测定，满足相关残留量检测的要求。

参 考 文 献

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［11］ SN/T 1951-2007 进出口保健食品中伐地那非、西地那非、他达那非的检测方法 液相色谱-质谱/质谱法［S］.

联系人：张书文；E-mail： zhangshun382@163.com

中图分类号：O657.7

文献标识码：A

文章编号：1008-6145（2016）01-0044-03

doi：10.3969/j.issn.1008-6145.2016.01.012

收稿日期：2015-11-20

Determination of Vardenafil-Sildenafil and Tadalafil in Liqueur by UPLC-MS/MS

Zhang Shuwen， Wang Kun， Han Shengqian
（Yantai Institute for Quality Supervision & Inspection of Product， Yantai Quality Certification Consulting Center， Yantai 264003， China）

AbstractSamples were extracted by methanol， vardenafil， sildenafil and tadalafil in liqueur were determined by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry at the same time. With mobile phase of methanol-0.1% formic acid solution， the mass spectrometry was operated in the positive ion mode of multiple reaction monitoring.The linear range of vardenafil， sildenafil and tadalafil was 5-1 000 μg/L， the detection limit was 0.001 mg/kg， and correlation coefficient was more than 0.999. The average recoveries of vardenafil， sildenafil and tadalafil were 91.0%-96.0%， 92.0%-96.0% and 89.5%-92.4%， respectively， and the relative standard deviation（RSD） was less than 2%（n=6）. The method is simple， rapid， high efficiency and yield， which is suitable for determination of vardenafil， sildenafil and tadalafil in liqueur.

Keywordsliqueur； UPLC-MS/MS； vardenafil； sildenafil； tadalafil