赵辉

（菏泽医学专科学校，山东 菏泽 274000）

牛蒡子对高糖刺激大鼠系膜细胞增殖作用的机制研究

赵辉

（菏泽医学专科学校，山东 菏泽 274000）

目的 探讨牛蒡子对高糖刺激的大鼠系膜细胞（GMC）增殖的影响。方法 大鼠GMC与牛蒡子(100μ mol/L、10μ mol/L)培养48 h后，采用MTT法检测系膜细胞的增殖情况；ELISA法检测转化生长因子-β1（TGF-β1）的分泌水平；实时定量PCR方法检测血管内皮生长因子(VEGF)和血小板衍生性生长因子（PDGF）mRNA的表达。结果 牛蒡子显著抑制高糖诱导的GMC增殖，降低TGF-β1的分泌，降低VEGF和PDGF mRNA的表达。结论 牛蒡子可以显著抑制高糖诱导的GMC增殖，该作用可能与降低TGF-β1、VEGF和PDGF的表达有关。

牛蒡子；转化生长因子β1；血管内皮生长因子；血小板衍生性生长因子

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞来源 大鼠GMC，购自武汉大学细胞培养物保藏中心。

1.1.2 主要试剂 RPMI 1640、MTT、DMSO：美国Gibco公司；引物：上海博尚生物有限公司；TGF-β1试剂盒：武汉博士德生物有限公司；RNA提取、逆转录及PCR试剂盒：TaKaRa Bio公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组 GMC在含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中培养，37℃、5%CO2的培养箱中孵育，2 d传代一次，取对数期细胞用于实验。将细胞分为四组，即阴性对照组(含葡萄糖5.4 mmol/L)、高糖组(含葡萄糖30.0 mmol/L)、牛蒡子高浓度组(含牛蒡子100μ mol/L，葡萄糖30.0 mmol/L)、牛蒡子低浓度组(含牛蒡子10μ mol/L，葡萄糖30.0 mmol/L)。

1.2.2 MMT法检测GMC增殖 取对数期的GMC，置于96孔板中，按照1.2.1中要求分组，每组设6个副孔，培养48 h后，每孔加入20 μ l MTT（5 mg/ml），继续培养4 h，弃去培养基，每孔加入150μ l DMSO，轻轻震荡10 min，使用酶标仪测定490 nm处各孔的吸光度值(OD值)，检测GMC增殖情况。

1.2.3 ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1的含量取对数期的GMC，置于24孔板中，按照2.1中要求分组，每组设6个副孔，培养48 h后，离心收集上清液，按照ELISA试剂盒操作说明书检测TGF-β1的含量。……