宋能，谭杨，罗凤玲，关清，闫明哲，潘勤，章晓联Δ

(1.武汉大学 病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院 免疫学系，湖北 武汉 430071；2.武汉市医疗救治中心，湖北 武汉 430071)

微滴数字PCR定量检测全血样品中结核分枝杆菌特异CFP10基因

宋能1，谭杨1，罗凤玲1，关清1，闫明哲2，潘勤1，章晓联1Δ

(1.武汉大学 病毒学国家重点实验室/湖北省过敏及免疫相关疾病重点实验室/武汉大学医学研究院/武汉大学基础医学院 免疫学系，湖北 武汉 430071；2.武汉市医疗救治中心，湖北 武汉 430071)

目的 采用微滴数字PCR技术(droplet digital PCR, ddPCR)检测全血中结核分枝杆菌特异性CFP10(10-kDa culture filtrate protein，CFP10)基因的拷贝数含量。方法 收集10例活动性肺结核患者(active tuberculosis，aTB)、10例肺外结核患者(extrapulmonary tuberculosis，EPTB)和5例健康对照者(healthy donars , HDs)全血并提取DNA，优化引物最佳扩增条件并制定重组质粒标准曲线，对样本中CFP10基因的拷贝数含量分别用ddPCR与实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)进行检测和比较。 结果 对重组质粒的灵敏度检测显示ddPCR技术明显优于qPCR技术。对样本的检测显示qPCR技术检测aTB、EPTB患者与健康人的全血中CFP10含量之间无统计学意义；但是ddPCR技术检测aTB、EPTB患者与健康人之间有显著统计学意义(P<0.0001)； ddPCR检测aTB和EPTB患者(共20例)CFP10 基因绝对定量的浓度约为3.4～94.0 copies/μL。结论 本研究首次报道采用ddPCR技术能灵敏地用于TB患者全血的诊断。

微滴数字PCR; 结核分枝杆菌；定量检测；CFP10

结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)，俗称结核杆菌，是引起人结核病的主要病原菌。结核病目前仍是很多发展中国家需要面临的公共健康问题。据世界卫生组织(WHO)2012年调查报告显示，全球每年约有130万人死于结核病[1]。目前全球有将近1/3的人感染过结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)，感染人数以每年800～1000万的速度增加，每年有近300万人死于结核病[2]。……