彭璐，金鑫，李志群，连一江，张丹，夏智波

(1.厦门大学 医学院，福建 厦门 361102；2.厦门市手性药物重点实验室，福建 厦门 361102； 3.厦门大学附属第一医院 心内科，福建 厦门 361003)

红杜仲不同乙醇浓度提取物对HaCaT细胞抗氧化作用的比较及其抗氧化机制的研究

彭璐1,2，金鑫1,2，李志群1,2，连一江1,2，张丹1,3，夏智波1Δ

(1.厦门大学 医学院，福建 厦门 361102；2.厦门市手性药物重点实验室，福建 厦门 361102； 3.厦门大学附属第一医院 心内科，福建 厦门 361003)

目的 本研究对红杜仲不同乙醇浓度提取物抑制H2O2诱导的HaCaT细胞氧化应激损伤作用进行筛选。方法 以不同浓度乙醇进行回流提取分别获得了30%、50%、70%及95%乙醇提取的四种红杜仲醇提取物(Parabarium micranthum ethanol extract，PEE)，利用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-Diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl，DPPH)法测定其体外清除自由基的能力。以人永生化表皮细胞HaCaT为研究对象，通过不同浓度H2O2处理细胞并筛选以200 μmol/L作为建立H2O2诱导的氧化应激损伤模型的最适浓度。设立对照组、H2O2损伤组和红杜仲-H2O2组。通过微板法和比色法测定内源性抗氧化酶活力及细胞存活率，2’，7’-二氯荧光黄双乙酸盐(2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate，DCFH-DA)荧光探针检测细胞内氧自由基(reactive oxygen species，ROS)水平，逆转录PCR测定Nrf2 mRNA表达量。结果 不同乙醇浓度提取的PEE在体外均具有清除DPPH自由基的作用，效果最强的70% 乙醇提取的PEE的IC50为7.6 mg/L；在细胞水平上，H2O2诱导使得HaCaT细胞内抗氧化酶SOD及CAT活力降低，50%、70%及95%乙醇提取的PEE能够显著提高细胞内抗氧化酶活力。其中70%乙醇提取的PEE的作用最为显著，抗氧化酶活力的提高表现出剂量依赖性，并且能显著提高细胞存活率、降低细胞内ROS的水平(与氧化应激组比，P<0.05或P<0.01)。同时，70%乙醇提取的PEE能够显著诱导抗氧化相关信号通路基因Nrf2 mRNA的表达。结论 70%乙醇提取的PEE可能通过激活Nrf2抗氧化信号通路，提高抗氧化酶活性，降低ROS水平，从而具有保护HaCaT细胞免受H2O2诱导的氧化损伤作用。

红杜仲；……