李 红，刘成倩，易建中

（上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海201106）



人类多效生长因子Pleiotrophin的原核表达

李 红，刘成倩，易建中*

（上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海201106）

摘 要：根据GenBank上公布的Ptn核苷酸序列设计1对引物，利用RT-PCR的方法扩增出人类Ptn基因，将其克隆到原核表达载体pET-30a上，得到重组质粒pET-30a-Ptn。将重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞并进行表达条件优化，经SDS-PAGE电泳及Western Blotting分析表明，融合蛋白在0.5 mmol/L IPTG、37℃条件下诱导3 h表达量最高，其分子质量约24.9 kD，表达产物主要以包涵体形式存在，且表达的融合蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。

关键词：Pleiotrophin；原核表达；条件优化

Pleiotrophin（PTN）最早是1989年Bohlen等［1］从成体牛脑中分离纯化出的一种可与肝素结合的蛋白质，称为多效生长因子。Ptn基因在牛、鼠、人和鸡之间高度保守［2］，是目前已知的所有生长因子中最保守的一种基因。Ptn基因的表达产物是一种具有分泌性和多效生长因子作用的蛋白，在细胞的生长、分化及发育过程中均起重要作用［3］。研究表明，PTN具有刺激细胞增殖及迁移、细胞转化、促进血管生成、促进神经细胞的转化/轴突生长、肿瘤的生长、炎症反应、创伤修复、胚胎发育和参与骨发育等功能［4-9］。多种因子或化学物质如：成纤维生长因子（fibroblast growth factor，FGF）、血小板源生长因子（platelet derived growth factor，PDGF）、激素、一氧化氮（NO）都可以调节PTN的表达。PTN表达也可被炎症中的巨噬细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞及缺血损伤部位的其他细胞上调［5］。外源Ptn基因导入可使NIH3T3细胞、SW13细胞发生恶性转化。因此，PTN作为肿瘤治疗的潜在分子靶点日益受到关注［10-11］。……