王甫成，纪东汉,龚道锋

1.安徽中医药科学院亳州中医药研究所，安徽亳州，236800；2.亳州职业技术学院药学院，安徽亳州，236800

不同生长期女贞子生物量积累及特女贞苷含量动态变化研究

王甫成1，2，纪东汉1，2,龚道锋1，2

1.安徽中医药科学院亳州中医药研究所，安徽亳州，236800；2.亳州职业技术学院药学院，安徽亳州，236800

摘要：采用HPLC法研究8个不同生长期女贞子中特女贞苷指标性成分含量和醇溶性浸出物及折干率动态变化。结果表明,8月底到10月底期间采收的女贞子中特女贞苷含量较高，均超过药典规定含量标准的3倍，且总峰面积均高于1.10×104，色谱峰个数达25个；同时醇溶性浸出物含量及折干率随生长期的延长呈上升趋势。结合试验测得数据和相关文献，确定女贞子在10月份生长期内生物量积累及活性成分处于较好水平，故建议皖北地区女贞子药材在该时间段内采收，药材质量较好。

关键词：女贞子；特女贞苷；动态变化；生长时期；采收期；HPLC

女贞子为常用大宗药材，其药材及饮片应用较为广泛，《神农本草经》收载并列为上品。女贞子为木犀科女贞(Ligustrum lucidumAit.)的干燥成熟果实，性味甘、苦、凉，归肝、肾经，具有滋补肝肾、明目乌发之功效[1]。罗玲英[2]等对国家标准中收载的中成药制剂进行了梳理，发现以女贞子作为“君、臣、佐、使”药的各类制剂达115余种。2015版《中国药典》规定女贞子在冬季果实成熟时采收，但在生产上从初果期到成熟期采收均有之，药材市场流通都以统货进行交易，直接影响其品质和质量。自2010年版《中国药典》将特女贞苷作为女贞子药材及饮片定量指标性成分以来，未见以特女贞苷为指标考察女贞子不同生长期与特女贞苷含量变化的研究报道，同时未见有皖北地区女贞子最佳采收期的相关报道。故本研究采用高效液相色谱法考察不同生长期女贞子中特女贞苷含量的变化，同时对女贞子不同生长期的折干率和醇溶性浸出物含量等生物量积累情况进行考察，以期为女贞子适时采收和商品规格划分提供实验依据。

1仪器与试药

安捷伦1260型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；电子分析天平(AUW220D，日本岛津)；特女贞苷(111926-201404，中国食品药品鉴定研究院)；甲醇(美国TEDIA公司，色谱纯)；娃哈哈纯净水；其他所用试剂为分析纯。

实验所用8批女贞子药材于2014年7月到2015年1不同月份采收，阴干备用，采收地点为安徽亳州谯城区十八里镇，由安徽中医药大学方成武教授鉴定为木犀科植物女贞Ligustrum lucidumAit.的果实。

2方法与结果

2.1色谱条件

采用C18色谱柱(AglientZorbaxSB-C18,4.60×250mm，5μm)，用甲醇-水(40∶60)作为流动相，进样量为5μL，按1.0mL/min流速进行洗脱,检测波长为224nm,柱温25 ℃[1]。

2.2溶液的配制2.2.1标准对照品配制

取适量特女贞苷对照品并精密称定，用甲醇溶解配制成0.50mg/mL特女贞苷标准对照品贮备液，依次精密量取合适体积已配制好的贮备液，置于10mL的容量瓶中，用甲醇稀释制成含特女贞苷0.05、0.10、0.15、0.25、0.30、0.40mg/mL6种不同浓度的特女贞苷标准对照品溶液，备用。

2.2.2供试品溶液制备

取采收的8批次女贞子样品粉碎成粗粉(过50目筛)，分别取0.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入50mL稀甲醇密塞后，精密称定质量，热回流提取1h，冷却，称定质量并用甲醇补足差量，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得[1]。

2.3专属性试验

将特女贞苷对照品溶液、空白对照液和女贞子样品溶液分别进样5μL，按既定色谱条件分析，记录色谱图，结果显示特女贞苷得到很好分离，相应色谱峰位置无干扰，色谱图见图1。

图1　各测试样品HPLC图谱

2.4线性关系考察

精密吸取“2.2”项下6种已配置好的特女贞苷系列浓度标准对照品溶液，依次按进样量5μL自动进样，按规定色谱条件分析检测，记录峰面积。分别以特女贞苷色谱峰峰面积和特女贞苷进样量(μg)为指标,进行线性回归计算，得Y=1901.10X-77.74，r=0.9994(n=6)，结果表明特女贞苷在0.25～2.0μg区间内线性关系良好。

2.5精密度试验

取浓度为0.25mg/mL的特女贞苷标准对照品溶液,按每次5μL进样量连续进样6次，测得特女贞苷色谱峰峰面积并计算峰面积RSD值为1.95%(n=6)，表明精密度较好。

2.6重复性试验

取2014年10月31日采收的女贞子样品，制备样品溶液6份，依上述方法测定，特女贞苷平均含量为2.17%，计算RSD值为1.53%(n=6)，表明重复性较好。

2.7稳定性试验

取2014年10月31日采收的女贞子样品，按规定色谱条件在0、2、4、8、16、32、48h进行分析测定，计算特女贞苷色谱峰峰面积RSD值为1.35%(n=6)，且特女贞苷色谱峰保留时间基本稳定，表明在48h内稳定性较好。

2.8回收率试验

分别取已知含有特女贞苷1.51%的女贞子药材粗粉(过50目筛)9份，各0.5g，精密称定后分3个平行组，置于具塞锥形瓶中，分别精密移入特女贞苷对照品储备液12、15、18mL，制成3个特女贞苷加样梯度样品，按规定方法制备供试样品溶液，进行加样回收实验，计算得到特女贞苷加样平均回收率为99.87%，RSD值为1.21%，结果见表1，表明本法加样回收较好。

表1　特女贞苷加样回收试验结果　　　　　　　　　　n=3

2.9样品测定

分别取不同生长期采集的女贞子药材样品各3份，按规定方法制备供试品溶液，并按既定色谱条件对不同批次女贞子药材进行分析测定，计算不同批次女贞子样品中特女贞苷的含量；另采用2015年版《中国药典》(四部)“通则 2201”项下规定的醇溶性浸出物测定方法，对不同生长期女贞子的醇溶性浸出物含量进行测定；同时对不同生长期采集的女贞子样品除去枝叶、果柄等杂质，阴干后测得干重，计算折干率。各项测定结果见表2，不同生长期女贞子中特女贞苷和生物量积累趋势，见图2。

表2　不同生长期女贞子生物量积累和特女贞苷含量测定结果　　　　　n=3

图2　不同生长期女贞子特女贞苷含量和生物量积累趋势图

3结束语

实验结果表明，从8月底到10月底期间采收的女贞子中特女贞苷含量较高，均超过2015年版《中国药典》标准规定含量的3倍，有效色谱峰个数和总峰面积均处于较高水平，其中8月底采收的女贞子中特女贞苷含量处于最高。戚志华等[3]研究女贞子在10月份出现齐墩果酸含量达到最高值，孔德平等文献报道[4-8]女贞子中齐墩果酸、熊果酸、红景天苷、多糖、黄酮类等有效成分积累和次生代谢在10月份波动较为稳定。由此看来，女贞子具有“滋补肝肾、明目乌发”的功效不是某个单一成分所能决定的，只对其中单一成分进行考察以此判定女贞子药材质量显然不符合实际，故实验同时考察了不同生长期女贞子醇浸物含量以及折干率这一影响产量的重要因素，进行多方面综合考察，故不将最佳采摘时间定在8月底。

女贞子的生长期与其内在物质积累和特女贞苷含量影响密切，女贞子随成熟度增加折干率和醇浸物含量呈上升趋势，产量也有所增长，经济效益也随之增加。但超过10月份后，多种活性成分呈下降趋势，糖类成分明显增多，给干燥和储存带来诸多不便，综合考虑，由于女贞子在10月份各项指标相对处于较好水平，因此皖北地区在该时间段内采摘女贞子药材质量较好。

参考文献：

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典[S]．一部．北京:中国医药科技出版社，2015：45-46

[2]罗玲英，赵益，吴德智，等．含女贞子中成药的剂型与工艺分析[J].中国药房，2010，21(33)：2199-2201

[3]戚志华，王四旺，王剑波．高效液相色谱法测定陕西境内不同产地、不同生长期女贞子中2组分的含量[J]．中国药房，2007，18(6)：5-457

[4]孔德平，陆林玲，钱大玮，等．女贞果实不同成熟期多指标化学成分动态积累的分析与评价[J]．南京中医药大学学报，2011，27(3)：273-276

[5]韩月芝，马振嗣，史冬霞，等．女贞子最佳采收期研究[J]．药物研究，2010，19(20)：24-25

[6]戴一，贾晓益，汪会．不同采收期女贞子中木犀草素和芹菜素动态变化研究[J]．时珍国医国药，2015，26(2)：461-463

[7]ZhihuaQI，QingweiWANG，ShuyunGUO，etal.Effectsofharvesttimeonthe5-HMFcontentsinLigustrilucidifructusanditsprocessedproducts[J]．MedicinalPlant，2013,4(7)：20-26

[8]任华益．不同采收月份和不同炮制方法对女贞子中红景天苷和酪醇含量的影响[J]．肿瘤药学，2011(2)：136-139

(责任编辑：汪材印)

doi:10.3969/j.issn.1673-2006.2016.05.032

收稿日期：2016-02-15

基金项目：安徽省高校自然科学研究重点项目(KJ2016A498)；安徽省高等教育振兴计划人才项目(皖教秘人(2014)181号)；安徽省高等学校质量工程项目(2015msgzs174,2015sjjd039,2014jxtd073)。

作者简介：王甫成(1979-)，安徽东至人，硕士，副教授，主要研究方向：中药加工炮制及质量标准。

中图分类号：R284.1

文献标识码：A

文章编号：1673-2006(2016)05-0120-04