徐佳庆，张　肖△，陆峰泉，马蔡昀,2

(1.苏州市盛泽医院检验科，江苏苏州 215228；2.南京医科大学第一附属

医院检验学部，江苏南京 210029)

·论著·

2012～2014年江苏某医院血培养阳性病原菌种类及耐药性监测

徐佳庆1，张肖1△，陆峰泉1，马蔡昀1,2

(1.苏州市盛泽医院检验科，江苏苏州 215228；2.南京医科大学第一附属

医院检验学部，江苏南京 210029)

摘要:目的监测2012～2014年本院医院感染患者中血培养为阳性标本中病原菌的分布及耐药性，为临床血流感染的经验用药提供参考依据。方法收集该院2012～2014年3 406例血培养鉴定结果；采用SIEMENS MicroScan WalkAway96plus系统或API系统鉴定细菌和真菌，细菌药物敏感性检测采用纸片扩散法；应用WHONET5.6软件进行数据分析。结果3 406例血培养标本中有309例阳性标本，其中革兰阳性菌占59.2%，革兰阴性菌占39.5%，真菌占1.3%；阳性标本中，排名前5的检出细菌分别是凝固酶阴性葡萄球菌(CNS) 40.5%(125/309)，大肠埃希菌15.5%(48/309)，金黄色葡萄球菌13.6%(42/309)，肺炎克雷伯菌8.4%(26/309)，铜绿假单胞菌5.8%(18/309)。病原菌耐药性分析结果显示：葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属耐药率各异，但未发现万古霉素和替考拉宁耐药的菌株，革兰阴性杆菌中，各菌属对抗菌药物均有一定的耐药率，但未发现亚胺培南的耐药株。结论血培养病原菌菌谱较广，以革兰阳性菌为主，革兰阴性菌次之，且耐药性情况普遍存在，应及时对血流感染病原菌进行耐药性监测并用于指导临床合理使用抗菌药物。

关键词:血培养；病原菌；耐药性

近年来，由于广谱抗菌药物的大量使用，免疫抑制剂，各种侵袭性操作及介入治疗手段的广泛应用，导致菌血症在医院的发生呈现上升的趋势，且分离出的病原菌对临床常用的抗菌药物的耐药性较高[1]。血培养是临床上诊断菌血症、败血症的重要依据[2]。本研究对本院2012～2014年血培养结果进行统计及阳性病原菌的耐药性进行分析，以期指导临床医生在血流感染上及时合理地使用抗菌药物。

1资料与方法

1.1标本来源收集2012～2014年本院临床各科室送检的血培养标本，去除同一病例中同一部位所获的重复菌株。

1.2仪器与试剂SIEMENS MicroScan WalkAway96plus全自动微生物鉴定仪及法国生物梅里埃公司API细菌鉴定系统；血培养采用美国BD公司BACTE9120全自动血培养仪及配套成人树脂需氧瓶和儿童树脂需氧瓶。

1.3方法无菌操作条件下采集静脉血，成人8～10 mL,儿童1～3 mL注入相应血培养瓶，置血培养仪中进行连续振荡培养并监测，仪器提示有阳性瓶时，立即转种至血平板，置35 ℃培养24～48 h，有菌生长则继续鉴定，接种同时做涂片染色，若5 d后仪器仍未报阳性，则按阴性报告。

1.4质控菌株大肠埃希菌(ATCC25922)、铜绿假单胞菌(ATCC27853)、金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、肺炎克雷伯菌(ATCC700603)、粪肠球菌(ATCC29212)均由卫生部临床检验中心提供。

1.5统计学处理采用WHONET5.6软件进行数据处理和统计学分析。

2结果

2.1血培养阳性率2012～2014年本院从3 406份血培养送检标本共分离出病原菌309株，阳性率为9.1%(309/3 406)，低于国内相关文献报道(检出率高于10%[3])；其中，革兰阳性菌占59.2%，革兰阴性菌占39.5%，真菌占1.3%。

2.2各科室阳性细菌分布309份血培养阳性病原菌中，排名前5的科室依次是内科36.2%(112/309)，妇科12.0%(37/309)，儿科10.0%(31/309)，肿瘤科8.4%(26/309)，重症监护病房(ICU)8.1%(25/309)。

2.3血培养阳性细菌菌株分布309份血培养阳性病原菌的分布，排名前5名的依次是凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)(40.5%，125/309)、大肠埃希菌(15.5%，48/309)、金黄色葡萄球菌(13.6%，42/309)、肺炎克雷伯菌(8.4%，26/309)、铜绿假单胞菌(5.8%，18/309)。详见表1(见《国际检验医学杂志》官网论文附件)。

2.4血培养病原菌种类与药物敏感性

2.4.1葡萄球菌的种类与药物敏感性血培养阳性标本中分离出的葡萄球菌共167株，包括42株金黄色葡萄球菌(25.1%)和125 株CNS(74.9%)，研究显示，CNS检出率最高，是血流感染的主要病原菌，与徐瑗瑗等[4]和顾兵等[5]报道一致 。药敏结果显示葡萄球菌对青霉素、红霉素的耐药率较高，均高于90.0%；对葡萄球菌敏感率较高的抗菌药物有阿米卡星、复方磺胺甲噁唑、庆大霉素、左氧氟沙星。但并未发现对万古霉素和替考拉宁的耐药株。详见表2(见《国际检验医学杂志》官网论文附件)。

2.4.2肠球菌和链球菌的种类与药物敏感性2012～2014年血培养阳性标本中，肠球菌和链球菌的检出率分别为3.6%(11/309)和1.6%(5/309)。其中分离出的11株肠球菌包括屎肠球菌3株，粪肠球菌3株，鸟肠球菌5株。药敏结果显示肠球菌对多种抗菌药物耐药率均较高，其中红霉素和青霉素的耐药率超过80.0%， 但未发现万古霉素和替考拉宁的耐药株。同样链球菌对青霉素和红霉素的耐药率也较高，均大于65.0%，而对其他抗菌药物的耐药率较低，均低于40.0%；同样，未发现耐万古霉素和替考拉宁的菌株。详见表3(见《国际检验医学杂志》官网论文附件)。

2.4.3肠杆菌科细菌和非发酵菌的种类与药物敏感性在95株肠杆菌科的细菌中，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是血培养阳性标本中检出率最高的两种肠杆菌科细菌，肠杆菌科细菌对头孢类抗菌药物的耐药率较高，均高于50.0%，对β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合物、阿米卡星、米诺环素的敏感率较高，均高于53.0%，未发现对碳青霉烯类抗菌药物的耐药菌株。在27株非发酵菌中以铜绿假单胞菌为主，检出率为66.7%。铜绿假单胞菌对哌拉西林、头孢他啶、头孢吡肟、庆大霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、米诺环素敏感率较高，均高于80.0%，未发现对碳青霉烯类抗菌药物的耐药株。详见表4(见《国际检验医学杂志》官网论文附件)。

3讨论

血流感染是指各种病原微生物和毒素侵入血循环，在血液中繁殖，释放毒素和代谢产物，从而引起全身感染。其病原学诊断是在临床症状的基础上，符合下述两条之一即可诊断：第一，血培养分离出病原微生物，若为常见皮肤寄生菌，需有2次或2次以上培养结果为同一菌种阳性；第二，血液中检测到病原体的抗原物质。正确的血培养分离出病原微生物，被认为是血流感染诊断的金标准，但由于血流感染病情严重，病死率高，及时准确地向临床报告血培养结果对患者的救治相当重要。本研究结果显示，本院血流感染的病原菌主要是革兰阳性球菌，其次为革兰阴性杆菌，且检出的病原菌分布较广，分离出的309株致病菌中革兰阳性菌为183株(59.5%)，CNS比例最高，这与国外的相关研究相一致[6-7]。CNS被认为是条件致病菌，有文献指出，CNS血培养阳性者仅12%～26%被诊断为血流感染[8]，但国外报道称，大约30%医院血流感染是由CNS引起的，原因是由于CNS能够产生大量的细胞间脂多糖黏附素和细胞外黏液样物质，它们不但具有抗吞噬作用，而且还有助于细菌自身黏附定植，容易滞留在各种物体表面，并且阻止抗菌药物向细菌细胞渗透，消毒处理困难，加上医护人员无菌操作欠严格，增加了交叉感染的机会[9]。所以说，CNS既是医院感染导致败血症的最常见细菌，同时又是最常见的血培养污染菌。因此，明确CNS是否是致病菌显得非常必要；常规情况下，需连续2次以上血培养检出该菌，才认为致病菌的可能性较大，如果只有1次阳性，则应该结合患者是否有菌血症或败血症症状，并且通过观察白细胞计数是否升高来判断。但需要提出的是，由于大多数临床医生只送检单份的血培养，本研究无法排除CNS污染的可能。此外，革兰阴性细菌占39.5%，肠杆菌科细菌的分离率最高占30.7%(95/309)。由此，可以说明葡萄球菌和肠杆菌科细菌是菌血症和败血症的主要病原菌。在非发酵菌中，以铜绿假单胞菌为主。本研究结果中最常见的几种临床分离菌为CNS、大肠埃希菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌，与2004～2007年南京地区血培养病原菌分布大致相仿[5]。

本研究通过对血培养阳性病原菌的耐药性进行分析，发现分离出的葡萄球菌对多种抗菌药物的耐药率都较高，而耐药率最高的是青霉素(β-内酰胺类药物)，其耐药机制为：由于该类菌株携带mec A基因，能编码产生新型的青霉素结合蛋白(PBP2a)，PBP2a与β-内酰胺类药物亲和力很低，因而很少或不被β-内酰胺类药物结合，仍然起合成细菌细胞壁的作用。未发现对万古霉素和替考拉宁耐药的葡萄球菌，而对阿米卡星敏感性较高，均大于58.0%。因此，对于葡萄球菌引起的感染，治疗可首选用糖肽类抗菌药物，如替考拉宁；也可用氨基糖苷类抗生素，如阿米卡星。肠球菌对青霉素、红霉素、左氧氟沙星的耐药率均大于70.0%，虽未发现耐万古霉素和替考拉宁的菌株，但出现了对万古霉素中介的菌株，应当引起重视。链球菌对青霉素和红霉素的耐药率均60.0%以上，对左氧氟沙星的耐药率为40.8%，未发现万古霉素和替考拉宁的耐药株。

肠杆菌科细菌对头孢类抗菌药物的耐药率均大于50.0%，其中对头孢类抗菌药物的耐药率均有增高趋势，这可能与医院内头孢类抗菌药物的大量使用有关。对β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合物、阿米卡星、米诺环素的敏感率较高，均大于53.0%，但并未发现对碳青霉烯类抗菌药物的耐药株，这对临床选择抗菌药物来治疗血流感染的肠杆菌科细菌具有非常重要的指导作用。此外，大肠埃希菌对左氧氟沙星的耐药率较高，其耐药率达到64.6%，所以，在选用喹诺酮类药物时，需要参照药敏结果，防止抗感染治疗的失效。

非发酵菌以铜绿假单胞菌为主。铜绿假单胞菌对哌拉西林、头孢他啶、头孢吡肟、庆大霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、米诺环素敏感率较高，均大于80.0%，未发现

对碳青霉烯类抗菌药物的耐药株。所以当临床医生在治疗铜绿假单胞菌时，应当根据药敏试验结果采用有效抗菌药物进行联合治疗，防止耐药菌的出现。但往往因为非发酵菌感染呈逐年上升趋势，增加了临床抗感染治疗的难度，因此临床在治疗非发酵菌感染时应该根据实验室的药敏结果合理用药，切忌滥用抗菌药物，这对控制医院感染具有重要意义。

总之，不管是由于抗菌药物的广泛使用，还是耐药菌株不断出现，亦或是细菌耐药机制日益复杂，这都给临床用药选择增添了困难。为此，做好对细菌耐药性的监测，严格的掌握各抗菌药物的适应证，控制预防性用药，缩短用药时间，才能为临床合理使用抗菌药物提供科学的依据。

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Analysis of the types and resistance surveillance of pathogens isolated from blood culture of some hospital from 2012 to 2014 in Jiangsu

XuJiaqing1，ZhangXiao1△，LuFengquan1，MaCaiyun1,2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,JiangsuShengzeHospital,Suzhou,Jiangsu215228,China;2.DepartmentofLaboratoryMedicine,theFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing,Jiangsu210029,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the distribution and antibiotic resistance of pathogens isolated from blood cultures of Jiangsu Shengze Hospital from 2012 to 2014,and to provide reference for clinical treatment of bloodstream infection.MethodsA total of3 406 blood culture samples were collected from the hospital from 2012 to 2014.Bacteria and fungus were identified by SIEMENS Micro Scan WalkAway 96 plus systems or API systems;bacterial drug sensitivity was determined by disk diffusion method;and WHONET 5.6 software was used for data analysis.ResultsAmong the 3 406 blood culture samples,309 cases were positive.Gram-positive bacteria accounted for 59.2%,gram-negative bacteria accounted for 39.5%,and fungi accounted for 1.3%.The top 5 were Coagulase negative staphylococcus,which accounted for 40.5%(125/309),Escherichia coli,which accounted for 15.5%(48/309),Staphylococcus aureus,which accounted for 13.6%(42/309),Klebsiella pneumoniae 8.4%(26/309) and Pseudomonas aeruginosa,which accounted for 5.8%(18/309) among the positive samples.The resistance analysis showed that rates of drug resistance about staph,Streptococcus and enterococcus were different,but no vancomycin and resistance strains were detected.About gram-negative bacilli,every kind of bacteria genera had drug resistance.But imipenem resistance strain was not fund.ConclusionBlood culture pathogenic bacteria spectrum is wide.The gram positive bacteria is given priority,gram negative bacteria takes second place,and the drug resistance is widespread.So we should monitor the blood bacteria resistance in time and guide clinical rational use of antimicrobial agents.

Key words:blood cultures；pathological bacteria；resistance

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.10.020

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)10-1350-03

(收稿日期：2015-10-28)

作者简介：刘微芬，女，主管技师，主要从事临床免疫检验研究工作。△通讯作者，E-mail：zhongm111@126.com。