杨姣姣，张莹，沈宇清，王洁，付波，张建琼

(东南大学医学院 病原生物学与免疫学系，江苏 南京　210009)

乳腺癌脑转移细胞系靶向肽体的表达与特异性鉴定

杨姣姣，张莹，沈宇清，王洁，付波，张建琼

(东南大学医学院 病原生物学与免疫学系，江苏 南京210009)

[摘要]目的：构建pFUSE- hIgG2- Fc2- BRBP1真核表达质粒表达BRBP1- Fc肽体，并验证其与乳腺癌脑转移细胞系(231- BR)的结合特异性。方法：合成带有EcoRⅠ、NcoⅠ酶切位点的脑转移性乳腺癌特异性肽BRBP1片段，利用该双酶切位点将其定向插入pFUSE- hIgG2- Fc2质粒，构建真核表达质粒pFUSE- hIgG2- Fc2- BRBP1。将测序正确的重组质粒转染至293T细胞真核表达BRBP1- Fc肽体，用蛋白质印迹实验验证蛋白表达，酶联免疫吸附试验、细胞免疫荧光等方法证实BRBP1- Fc肽体与231- BR细胞结合特异性。结果：成功构建重组质粒pFUSE- hIgG2- Fc2- BRBP1，蛋白质印迹法检测到BRBP1- Fc肽体的表达，分子质量约为37 kDa，并且证实BRBP1- Fc肽体与231- BR细胞特异性结合。结论：成功构建了真核表达重组质粒pFUSE- hIgG2- Fc2- BRBP1,表达了BRBP1- Fc肽体，并鉴定了其与231- BR细胞的结合特异性。

[关键词]肽体； 真核表达； 乳腺癌； 脑转移

自1989年构建CD4- Fc融合蛋白来阻止人类免疫缺陷病毒(HIV)攻击T细胞以来，Fc融合蛋白的应用得到越来越多的关注[1]。Fc融合蛋白是由肽或蛋白与免疫球蛋白(IgG)的Fc段铰链区融合而成，最早由Amgen公司命名为肽体。肽体整合了肽或蛋白的固有功能以及IgGFc段的结合特性，具有重要的生物学功能。

我们在前期工作中利用专一性脑转移乳腺癌细胞系231- BR[2]，通过噬菌体展示肽库全细胞筛选技术获得与靶细胞特异性结合的肽BRBP1[3]，在充分验证其结合特异性的基础上，利用该肽进行了分子成像和靶向递送抗肿瘤药物的研究，结果均显示出良好的成像及治疗效果[4]。……