黄魁英，冯永达，明飞平，肖安吉，卢志鹏，楚品品，黄瀚威，谭家裕，夏枫耿，黄朝远，杨　军，蔡海明，马苗鹏，张玲华（.广州市微生物研究所，广东广州50663；.华南农业大学生命科学学院广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室，广东广州5064）



猪Sirt5基因的克隆及其腺病毒载体的构建和鉴定

黄魁英1，冯永达2，明飞平1，肖安吉2，卢志鹏2，楚品品2，黄瀚威2，谭家裕2，夏枫耿1，黄朝远2，杨军2，蔡海明2，马苗鹏2，张玲华2
（1.广州市微生物研究所，广东广州510663；2.华南农业大学生命科学学院广东省农业生物蛋白质功能与调控重点实验室，广东广州510642）

摘要：为了从猪脑中克隆得到Sirt5基因，并构建腺病毒载体，提取长白猪脑组织总RNA，利用RT-PCR和PCR扩增得到Sirt5基因。再将此基因克隆至穿梭载体上，构建重组腺病毒的穿梭质粒pShuttle-IRES-Sirt5。经酶切线性化，电击转化已含骨架载体pAdEasy-1DNA的BJ5183+感受态菌，得到重组腺病毒质粒Ad-Sirt5。重组腺病毒质粒经酶切线性化鉴定。结果本试验获得的Sirt5基因与NCBI公布序列一致。利用细菌同源重组技术构建重组腺病毒载体，经酶切鉴定正确。表明本试验成功克隆得到Sirt5基因，并成功构建Sirt5基因的腺病毒载体。

关键词：猪；Sirt5基因；重组；腺病毒

冯永达（1992-），男，本科，从事农业生物技术工作，E-mail：931671302@qq.com

注：冯永达与黄魁英对本文具有同等贡献

Sirtuins（Sirt）蛋白家族是一类与寿命调节、新陈代谢和疾病有关的重要蛋白。目前在哺乳动物中已发现至少7种Sirt基因（Sirt1～Sirt7）。其中，Sirt5是存在于线粒体中的一种NAD+依赖性去乙酰化酶，在脑、肝、心和肺等广泛表达［1］。Sirt5在新陈代谢方面具有重要作用，但具体机制并不是很清楚，随着研究的深入，Sirt5有望成为代谢疾病治疗的新靶点。……