赵晓艳,曾志驰,穆丽丽,邓 悦,王 飞

(江西农业大学 生物科学与工程学院,江西 南昌 330045)

蛋白酶高产菌株的筛选鉴定与酶学特性研究

赵晓艳,曾志驰,穆丽丽,邓 悦,王 飞*

(江西农业大学 生物科学与工程学院,江西 南昌 330045)

摘要：以酪蛋白水解圈为筛选标记,在以酪蛋白为唯一氮源的平板上,从土壤中分离筛选到3株高产蛋白酶的菌株,经形态学鉴定和16S rRNA分析,将其分别鉴定为Bacillus sp. G1、Bacillus sp. G2、Stenotrophomonas sp. V1。将这3株菌株的发酵液通过硫酸铵分级沉淀初步纯化后,其比酶活分别为22.21、19.10和16.03 U/mg。菌株Bacillus sp. G1和Bacillus sp. G2所产蛋白酶的最适反应温度和最适反应pH值均为40 ℃和7.0；菌株Stenotrophomonas sp. V1所产蛋白酶的最适反应温度为70 ℃,最适酶反应pH值为 7.5。

关键词：蛋白酶；筛选；鉴定；酶学特性； Bacillus sp. G1； Bacillus sp. G2； Stenotrophomonas sp. V1

蛋白酶(Protease, EC 3.4)属于水解酶类,是最重要的三大工业用酶之一,销售额约占全球酶制剂市场的60%[1],被广泛应用于食品、酿造、医药、纺织、皮革、日用化学、洗涤剂、饲料以及水产加工等多个行业,在我国国民经济的发展中起着重要的作用[2]。产生蛋白酶的微生物种类繁多,细菌、病毒、真菌、原生动物等皆有报道[3-4]。目前,用于蛋白酶工业生产的菌株多为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌等[4-5]。在已知的3000多种蛋白酶中,绝大多数来源于常温生物,其作用的温度、pH值、离子强度范围均较窄,从而在应用上受到限制。因此,耐受低温、高温、盐、酸、碱的蛋白酶越来越受到关注[6-10]。在尊重生物多样性的基础上,寻找和开发新型微生物蛋白酶资源,仍然具有重要的科研、应用及商业价值。……