赵金艳+卢宏+张振武+梁洋

摘要：糖尿病是一种由遗传和环境因素共同引起的代谢紊乱综合征。与肝细胞核因子有关的幼年发病的成人型糖尿病（MODY） 属于特殊类型的糖尿病，分为6型，其中Ⅵ 型MODY 为bHLH 家族转录因子NeuroD 突变引起的疾病。在体内NeuroD能够与A类bHLH的转录因子E47结合，进而形成二聚体。这种二聚体能够与胰岛素基因的E盒高亲和力结合，从而激活胰岛素相关基因的转录表达；因此，NeuroD对胰腺β细胞的生理功能有很重要的影响。本试验利用PGMT-NeuroD-3′UTR质粒，通过一次PCR方法使NeuroD-3′UTR上的多个位点发生定点突变，并筛选出突变的目的片段；随后将突变的片断连接到萤光素酶报告载体PGL3-CONTROL上，构建了PGL3-3′NeuroD突变载体。该结果可为探讨NeuroD基因在胰腺β细胞发育中的生理功能，及进一步治疗糖尿病的研究提供了试验基础。

关键词：NeuroD；PCR；突变；载体构建；糖尿病

中图分类号： Q754

文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2016）04-0087-03

糖尿病（diabetes mellitus）是一种代谢性疾病，其特征为由于胰岛素分泌不足、胰岛素功能障碍或两者同时存在而导致的，以慢性高血糖并伴有碳水化合物、脂肪和蛋白质代谢紊乱[1]。糖尿病是一种由多种因素导致的疾病，这些因素包括遗传因素、自身因素（自身免疫）及环境因素[2]等。

神经分化因子1 （NeuroD-1） 是一种bHL H蛋白[3] 。在生物学中，NeuroD-1又称为β细胞E盒转录激活因子2 （Beta-2） 。NeuroD-1/Beta-2对靶基因的转录激活/抑制作用主要通过和靶基因中的特异性序列结合来实现的。同时，NeuroD-1/Beta-2也能够与其他靶基因的转录因子发生作用，协同调节靶基因的活性状态，进而影响相关基因的生理功能。……