马芳芳+蒋明义

摘要：为深入研究ABA信号转导机制以及筛选该信号途径中相关重要蛋白的相互作用，利用Gateway技术，以外源ABA处理的玉米叶片为材料首先构建了cDNA初级文库，初级文库再通过LR重组的方式最终构建成以pDEST22为目的载体的酵母双杂交cDNA文库。经质量鉴定，该文库的滴度为3.9×106 CFU/mL，文库总容量达到1.17×107 CFU，平均插入cDNA片段长度大于800 bp，重组率大于95%。结果表明所获酵母双杂交文库质量较高，符合文库构建的标准，保证了文库的覆盖度，为进一步开展互作蛋白筛选的后续工作奠定了基础。

关键词：ABA；玉米；酵母双杂交；cDNA文库；滴度；重组率；互作蛋白

中图分类号： S513.01；Q78

文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2016）04-0058-04

脱落酸（ABA）是一种重要的植物激素，它在植物生长发育的各个方面，包括种子发育、萌发和休眠、营养生长及对各种生物、非生物胁迫的响应等方面起作用[1-2]。水分胁迫下（包括干旱、盐渍），植物体通过迅速积累ABA以促进气孔关闭以及调节众多基因的表达，从而使植株对逆境环境做出适应反应[3-6]。大量研究表明，ABA信号转导是一个非常复杂的网络，许多重要的中间组分如胞内钙离子、钙调素、磷酸肌醇、cADPR、H+、活性氧、一氧化氮以及蛋白可逆磷酸化等都在ABA信号转导途径中发挥着重要的作用[7]。然而ABA参与的许多信号途径的详细过程特别是具体的分子作用机理仍有待阐明，鉴定参与ABA信号途径的细胞组分，并对其功能进行阐明分析，将有助于我们提高对ABA信号转导途径的认识。

酵母双杂交系统是一种用来研究蛋白质间相互作用的简便、快速而有效的方法[8]，该方法由Fields和Song于1989年首先建立，至今被广泛应用于生物研究的各个领域[9-10]。……