周景明，刘芳冰，祁艳华，张改平,2，栗 宁，王爱萍*

(1.郑州大学生命科学学院，河南郑州 450001；2.河南农业大学,河南郑州 450002)



猪瘟病毒E0蛋白在PK-15中的表达与鉴定

周景明1，刘芳冰1，祁艳华1，张改平1,2，栗 宁1，王爱萍1*

(1.郑州大学生命科学学院，河南郑州 450001；2.河南农业大学,河南郑州 450002)

摘要[目的]研究猪瘟病毒(CSFV)E0基因在PK-15细胞中的表达特性。[方法]通过PCR方法克隆了E0基因全长681 bp的片段，连接到真核表达载体pEGFP-C1上，构建出重组质粒并进行双酶切鉴定。[结果]成功构建出重组质粒pEGFP-E0。通过双酶切鉴定，PCR鉴定和测序确定了目的基因大小一致，插入位置完全正确后，利用Lipofecta mine 2000转染试剂盒将重组质粒转染到猪肾细胞PK-15中，转染48 h后在荧光显微镜下观察，可以看到大多数细胞呈现出绿色荧光，说明转染成功。通过G418筛选后，在荧光显微镜下仍能观察到部分细胞能够呈现出绿色荧光，这表明重组融合蛋白pEGFP-E0在PK-15细胞中得到了表达。[结论]获得的能够表达重组融合蛋白的细胞克隆，为进一步大量表达与纯化E0糖蛋白、制备其单抗以及研究猪瘟病毒E0糖蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词猪瘟病毒；E0蛋白；增强型绿色荧光蛋白；PK-15细胞

猪瘟(Classical swine fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起猪的一种高度接触性、致死性传染病，临床上以高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征[1]。世界动物卫生组织将其列为 A 类传染病，我国也将其列为一类传染病。猪瘟病毒是黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus),为单股正链RNA病毒[2]，其基因组编码1个多聚蛋白，经宿主细胞和病毒蛋白酶裂解后产生4种结构蛋白(C(p14)、E0(gp44/48)、E1(gp33)和E2(gp55))和7种非结构蛋白(Npro、p7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)[3]。……