孙志华,张　辉,刘来珍,刘　娟,韩玉霞,关　团,王　浩,陈创夫

(石河子大学 动物科技学院，动物疾病防控兵团重点实验室，新疆 石河子 832003)



布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应分子BPE123和BPE275基因的原核表达与鉴定

孙志华,张辉,刘来珍,刘娟,韩玉霞,关团,王浩,陈创夫

(石河子大学 动物科技学院，动物疾病防控兵团重点实验室，新疆 石河子 832003)

[摘要]【目的】 克隆布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应分子 BPE123 和 BPE275 的基因并进行诱导表达。【方法】 从牛种布鲁氏菌2308 株基因组中 PCR 扩增BPE123和BPE275基因片段，亚克隆到 pGEM-T Easy 载体中并测序。将BPE123 和 BPE275基因克隆至融合表达载体pET-28a，构建表达重组质粒 pET-28a-BPE123和pET-28a-BPE275，在大肠杆菌中进行诱导表达，Western blot分析重组蛋白His-BPE123 和 His-BPE275的免疫学特性。【结果】 PCR 扩增获得了 462 bp 的BPE123 基因片段和762 bp的BPE275基因片段，成功构建了pET-28a-BPE123、pET-28a-BPE275原核表达载体，并在大肠杆菌中成功表达了BPE123和BPE275蛋白，经 SDS-PAGE 检测，重组融合蛋白BPE123、BPE275 的分子质量分别约为22和31 ku，布鲁氏菌免疫动物血清能特异性识别表达的蛋白。【结论】 克隆了分泌蛋白BPE123、BPE275基因片段，并成功表达了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应分子 BPE123和BPE275。

[关键词]布鲁氏菌；Ⅳ型分泌系统；效应蛋白

布鲁氏菌病(Brucellosis)简称为布病，其致病菌为布鲁氏杆菌(Brucella)。布鲁氏杆菌是一种革兰氏阴性、兼性胞内寄生菌，它可以感染人和动物，人主要表现为持续性感染并常伴有关节炎和心内膜炎等症状；动物感染后，公畜表现为睾丸肿胀，母畜表现为不孕或流产。作为胞内寄生菌，胞内生存和复制是布鲁氏菌的主要毒力特征[1]，布鲁氏菌主要通过皮肤或消化道黏膜侵入机体，随着淋巴液的循环到达淋巴结后被巨噬细胞吞噬[2]，巨噬细胞和胚胎滋养层细胞是布鲁氏菌主要的宿主细胞[3]。……