朱小甫，吴旭锦

(咸阳职业技术学院 畜牧兽医研究所 动物疫病分子生物学诊断实验室，陕西 咸阳 712000)



PRRSV经典株和变异株RT-nPCR鉴别诊断方法的建立

朱小甫，吴旭锦

(咸阳职业技术学院 畜牧兽医研究所 动物疫病分子生物学诊断实验室，陕西 咸阳 712000)

[摘要]【目的】 建立一种能够区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法，能够从病料组织、血清或精液中直接进行目的基因检测，达到快速诊断的目的。【方法】 根据GenBank上发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒基因序列，设计并合成了2对引物，通过改变不同的反应体系和反应条件，建立PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法，并通过灵敏性试验、特异性试验、病料组织和血清或精液样品检测，验证建立RT-nPCR方法的适用性。【结果】 建立了PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR诊断方法，该方法检测的cDNA含量极限为1.3×10-7pg/μL；且仅能从PRRSV毒株中扩增到目的条带，从CH-1R经典株扩增出649 bp条带，从SXXY/2013变异株扩增出562 bp条带，电泳后能清晰区别，而从其他参考毒株中均不能扩增出目的条带。从48份疑似病料组织和血清中能直接检测出31份阳性结果。【结论】 建立了一种灵敏度高、特异性好、可直接从病料组织和血清中快速鉴别PRRSV经典株和变异株的RT-nPCR方法。

[关键词]猪繁殖与呼吸综合征；经典株；变异株；诊断方法

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)又称蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒 (Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种猪群重大疫病[1-2]。1987年，本病首次在美国北卡罗来纳州爆发，随后迅速扩散到世界各地[3]。1996年，我国郭宝清首次从北京地区发病的猪群中分离出PRRSV，从而证实了本病在我国的存在[4]。……