杜红岩，周嘉南，潘 峰，杨 华，闫振成，倪银星，祝之明，钟 健

(1.第三军医大学大坪医院野战外科研究所 高血压内分泌科,全军高血压代谢病中心,重庆市高血压研究所，重庆 400042；2.第三军医大学科研部 生物医学分析测试中心，重庆 400038)

气相色谱-质谱联用法测定小鼠血清非胆固醇甾醇

杜红岩1，周嘉南1，潘 峰2，杨 华1，闫振成1，倪银星1，祝之明1，钟 健1

(1.第三军医大学大坪医院野战外科研究所 高血压内分泌科,全军高血压代谢病中心,重庆市高血压研究所，重庆 400042；2.第三军医大学科研部 生物医学分析测试中心，重庆 400038)

目的 本研究旨在建立气相色谱-质谱联用法(gas chromatograph-mass spectrometer,GC-MS)测定小鼠血清中非胆固醇甾醇的方法。方法 采集32周龄雄性C57BL/6J小鼠血清，以5α-胆甾烷为内标，经过氢氧化钾乙醇溶液皂化、正己烷萃取、硅烷化试剂衍生等步骤，进行小鼠血清样本进样前处理。运用气相色谱-质谱联用仪对小鼠血清非胆固醇甾醇进行定性及定量分析。配制不同浓度混标溶液进行GC-MS法分析制备标准曲线。制备高、中、低浓度混标溶液与等量小鼠血清混合处理后测定非胆固醇甾醇含量，进行加标回收率、精密度及重复性试验。采用酶比色法测定小鼠血清总胆固醇(total cholesterol,TC)含量。结果 GC-MS法测得小鼠血清角鲨烯(squalene)、去氢胆甾醇(desmosterol)、菜油甾醇(campesterol)、豆甾醇(stigmasterin)和β-谷甾醇(β-sitosterol)的含量依次为(4.52±0.94、1.71±1.57、22.17±9.86、0.69±0.05和8.82±3.92)μg/mL；标准化后角鲨烯/TC、去氢胆甾醇/TC、菜油甾醇/TC、豆甾醇/TC和β-谷甾醇/TC，分别为(5.92±2.06、1.89±2.26、26.52±9.54、0.90±0.18和9.08±5.51)μg/mg，平均加标回收率依次为95.65%、96.75%、99.14%、103.52%和100.57%，日内精密度及重复性试验相对标准偏差(relative standard deviation，RSD)均在5.00%以下。……