崔彦芹 李尚伟 张丽萍 罗洪发 李云峰 查仁明

摘要：【目的】构建双价抗虫基因表达载体并转化水稻，为选育广谱、高抗转基因抗虫水稻提供技术参考。【方法】构建半夏凝集素基因（pta）和苏云金杆芽孢菌基因（Bt）两个抗虫基因的双价表达载体pCAMBIA1301-Bt-pta，利用大肠杆菌DH5α和根癌农杆菌LBA4404转化水稻恢复系辐恢838，同时对转化植株进行GUS染色及PCR鉴定。【结果】以构建的双价植物表达载体pCAMBIA1301-Bt-pta为模板，PCR扩增到pta基因的部分片段，大小为807 bp，且该载体经Hind Ⅲ酶切后，能得到15854 bp的中间载体pCAMBIA1301-Bt片段和2046 bp的pta基因片段。对转化植株进行GUS染色，得到3株转基因阳性植株，经PCR鉴定结果显示外源基因已成功导入水稻。【结论】通过构建双价抗虫基因表达载体并转化水稻，成功获得的转基因植株可用于水稻抗虫转基因恢复系及组合的研究，以提高其抗病虫害能力。

关键词： Bt基因；pta基因；载体构建；转基因水稻；鉴定

中图分类号： S511.035.3 文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2016）02-0169-05

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【研究意义】水稻是最重要的粮食作物之一，世界上半数以上的人口以水稻为主食。虫害是造成水稻减产的主要原因，据报道，田间水稻害虫种类在624种以上，每年因螟虫造成的产量损失达1.0×1010 t，对其品质也造成严重威胁（刘立军等，2009；朱祯，2010；张岚等，2011），因此选育抗虫水稻品种尤为重要，但仅靠常规育种难以解决抗虫育种资源稀缺的问题，须通过研究转基因水稻来完成。苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）基因的表达产物为Bt毒蛋白，是一种杀虫晶体蛋白（Insecticidal crystal protein，ICP），其杀虫效果安全、高效，对鳞翅目、双翅目、鞘翅目等昆虫具有高度特异性（孟志刚，2012）。……