潘红烨 邓海欣 陈周全 张跃飞 王龙虎

[摘要]醇沉工艺是现代中药生产中常用的精制方法，其目的是去除杂质而提高药品疗效。但是，由于包裹损失等原因，醇沉过程难免会造成有效成分部分损失。所以，判定醇沉工艺优劣的重要依据在于相关物质的得失均衡。作为感冒药，感冒灵在临床上得到了广泛和良好的使用，其生产工艺的各环节需要有针对性的深入研究。该文着眼于感冒灵水提液醇沉工艺过程的去除杂质和保留有效成分的平衡关系，选择了有效成分蒙花苷的保留率和干浸膏得率作为评价指标，前者反映有效成分保留，而后者反映杂质去除。研究工作用单因素实验，考察了醇沉时间、初始乙醇浓度、终点乙醇含量及初膏密度等多种工艺因素对感冒灵醇沉的影响，在得失均衡的原则下确定了感冒灵醇沉工艺的优化参数是，醇沉时间为16 h，初始乙醇浓度为95%，终点乙醇含量为70%，初膏相对密度为110。该研究的意义在于，它为感冒灵醇沉工艺优化提供实验研究基础，同时对于其他中药口服剂的醇沉工艺优化也有借鉴作用。

[关键词]感冒灵；醇沉；蒙花苷；干浸膏

[Abstract]Ganmaoling granule is the first brand of domestic cold medicine sales， but its preparation method and process control parameters are relatively rough Therefore it is urgent to upgrade the technologies of large varieties of traditional Chinese medicine （TCM）. This paper focused on the balance between the remove of impurity and the retention of linarin during the process of alcohol precipitation of Ganmaoling granules The effects of four factors on the process were investigated via single factor experiments The results showed that the precipitating period， the initial ethanol concentration and the final ethanol concentration had a great effect on retention of linarin while the initial density of the extract has not Similarly， the initial ethanol concentration， the final ethanol concentration and the initial extract density have a great effect on the yield of dry extract while the time of alcohol precipitation has not The parameters of alcohol precipitation of Ganmaoling granules were optimized as 16 h of precipitating period， 95% ethanol as the initial reagent， 70% of the final ethanol concentration， and 110 of the initial extract density

[Key words]Ganmaoling granules； alcohol precipitation； linarin； dry extract

doi：10.4268/cjcmm20160802

感冒灵处方是由三叉苦、岗梅、金盏银盘、野菊花等中药与对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因3味化学药组成，具有中西药结合治疗感冒协同增效的特点[1]。虽然感冒灵疗效突出、服用安全，深受消费者的欢迎，但是作为较早研发上市的药物，感冒灵颗粒的基础研究相对简单，与现在的新药法规相比，缺少完整系统的生产工艺，其生产工艺较传统，质量标准较低，对于药品质量的控制性差，其生产工艺的各环节迫切需要有针对性的深入研究，其中也包括醇沉工段。感冒灵中药水提液含一些无效成分如糊化淀粉、油脂、脂溶性色素、树脂、树胶等，为了保证药品质量和稳定性，需要醇沉除杂[2]。在中药制剂中，醇沉是常用的精制纯化方法，其目的是去除杂质而提高药品疗效。目前为止，有关醇沉工艺和机理的研究却不多[3]。醇沉工艺优化经常采用正交实验[49]。醇沉工艺是一个涉及多因素共同发挥作用的复杂过程，正交实验只反映综合结果，无法揭示解析内在原因。有人也采用单因素实验研究醇沉过程，但评价指标较单一难以全面地反映醇沉工艺的效果[10]。与已有研究思路不同，本文着眼于醇沉工艺的得失均衡，有针对性选择蒙花苷保留率和干浸膏得率作为评价指标。前者反映有效成分保留，而后者反映杂质去除，二者结合以反映醇沉的去除杂质与保留有效成分的对立统一，从而优化感冒灵醇沉工艺。

1材料

Agilent 1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），H1650W高速离心机（长沙湘仪仪器有限公司）；851型磁力搅拌器（上海志威实验装置有限公司）。

蒙花苷对照品（成都曼斯特公司，批号MUST12081203）；甲醇为色谱纯，其他试剂为分析纯。实验所用的感冒灵清浸膏由华润三九医药股份公司提供。

2方法及结果

21蒙花苷含量测定蒙花苷含量测定参考文献[11]的方法。相同的体积下的蒙花苷保留率（θ）计算方法如下。

θ=醇沉上清液中蒙花苷含量/醇沉前清膏中蒙花苷含量×100%。

22干浸膏得率测定精密量取醇沉后上清液25 mL，于水浴蒸干后于烘箱中干燥到恒重，置于干燥器中冷却后称定质量。干浸膏得率（η）计算方法如下。

η=（干浸膏质量/25）×上清液总体积/初膏质量×100%。

23醇沉时间影响称取50 g相对密度为110（16 ℃测定，下同）的感冒灵清膏5份，以10 mL·min-1匀速加入95%乙醇使药液终点乙醇浓度为65%，然后于室温下分别放置8，12，16，24，32 h，再量取上清液体积，测定蒙花苷含量并计算θ，并按22项下公式计算η，结果见图1，2。

由图1可知，在一定范围内，随着醇沉时间的延长，蒙花苷保留率逐渐升高。当醇沉时间超过16 h时，蒙花苷保留率反而开始下降。这是因为在16 h之后由于沉淀颗粒逐渐增大，颗粒与颗粒间间隙变小，逐渐聚集成板结的团块状，容易把蒙花苷包裹夹带在其中从而造成损失。图2则反映，醇沉时间对干浸膏得率影响不大。杂质在乙醇溶液的析出在8 h内已达到平衡，再延长醇沉时间，杂质去除量变化不大。

24初始乙醇浓度影响再取相同的感冒灵清膏5份，以相同的流速分别加入75%，80%，85%，90%，95%乙醇使药液终点乙醇含量为65%，乙醇加完后将烧杯密封，于常温下放置24 h后量取上清液体积，同样方法测定并计算θ和η，结果见图3，4。

随着初始乙醇浓度增加，蒙花苷的保留率呈上升趋势。实验发现，如果初始乙醇浓度低于90%，醇沉液静置24 h后，其中沉淀依然为泥糊状，故醇沉不完全，难以过滤，上清液总体积减少。而最终的沉淀成型状态不仅影响到有效成分的转移率及杂质的去除率，而且关系到最后的排渣问题。若沉淀呈细腻泥糊状，表明沉淀不完全，必然会降低有效成分转移率及杂质去除率；若沉淀黏稠板结成块则排渣困难。因此，在优化的醇沉工艺条件下所形成的沉淀物应该是疏松的易于固液分离的颗粒状团聚物。这一点对于中药生产过程的实际操作至关重要。综合考虑多方面因素，本文认为，初始乙醇应该选择95%乙醇。

25终点乙醇含量的影响取相同的感冒灵清膏5份，同样的方法加入95%乙醇使药液终点乙醇含量分别为55%，60%，65%，70%，75%，加完放置24 h，然后量取上清液体积，同样方法测定并计算θ和η，结果见图5，6。

由图5可知，在一定范围内，随着终点乙醇含量的增加，蒙花苷保留率逐渐升高；当乙醇含量大于70%时，随着乙醇含量升高，蒙花苷保留率却降低。其原因是，当终点乙醇含量过高，形成的沉淀颗粒粒度增大，沉淀板结，使蒙花苷更易被包裹于沉淀之中造成损失。由图6知，终点乙醇含量越高，干浸膏得率越低。这说明，乙醇含量越高，水溶性物质在其中的溶解度越小，除杂率越高。沉淀越多，除去的物质成分越多，包括无效杂质和其他可能的有效活性物质。所以，醇沉工艺选择需要考虑到去除杂质与保留有效成分的对立统一。因此，终点乙醇含量确定为70%。

26初膏密度的影响分别称取500 g感冒灵清膏5份，其相对密度分别为105，110，115，120，125，以10 mL·min-1加入95%乙醇使药液终点乙醇浓度为65%，然后室温下放置24 h，再量取上清液并记录其体积，然后同样方法测定并计算θ和η，结果见图7，8。

由图7可知，除相对密度为105的初膏醇沉的保留率偏低外，其他初膏的蒙花苷保留率均无明显差异。实验过程发现，相对密度为105的清膏加入乙醇并放置24 h后沉淀呈泥糊状，沉淀与上清液分界模糊，沉淀不完全，上清液总体积减少。而其他密度的初膏醇沉后上清液与沉淀分界清晰。因此，在一定范围内，初膏密度对蒙花苷保留率影响不大。图8表明，随着初膏密度的增大，干浸膏得率也增大。这是因为初膏相对密度越小，含水量越多，要达到同等的终点乙醇含量则需要消耗更多的乙醇。随着乙醇量的增多则杂质的去除率也相应增大，即干浸膏得率减少。

3结论

众所周知，醇沉的本质是利用有效成分能溶于乙醇而杂质不溶于乙醇的特性，在加入乙醇后，有效成分转溶于乙醇中而杂质则被沉淀出来。但醇沉工艺条件不当，则不但不能很好地去除杂质，反而会对有效成分造成很大的损失。醇沉工艺的优化工作对中药制剂生产的整个过程至关重要。

一般来说，影响醇沉工艺的因素有初膏密度、初始乙醇浓度、终点乙醇含量、醇沉时间、醇沉温度、加醇方式及搅拌速度等[1214]。本文结合感冒灵颗粒大生产实际情况及预实验结果，从相关物质的得失均衡角度考虑，研究了醇沉时间、初始乙醇浓度、终点乙醇含量及初膏密度等对醇沉工艺效果的影响作用，从杂质去除和蒙花苷保留率两方面评价醇沉工艺。最终确定了感冒灵醇沉工艺的优化参数是，醇沉时间为16 h，初始乙醇浓度为95%，终点乙醇含量为70%，初膏相对密度为110。

选择该工艺条件的依据在于，在保证有效物质损失不严重的前提下，通过工艺调整而有效地去除那些无效物质。因为感冒灵颗粒是口服剂，醇沉除杂不宜过分，所以要求控制适量的干浸膏得率，避免有效成分损失。另一方面，中药作用机理复杂，其中有效成分尚没有完全探究透彻，所以，醇沉的程度要合适控制，得失均衡，适当地保留一些多糖类化合物，有利于保证中药疗效。

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[责任编辑孔晶晶]