陈传就

摘要：注射剂的质量关乎患者生命安危，因此我国GMP无菌附录规定“注射剂的生产须满足其质量和预定用途的要求，应最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。”通过分析微生物的主要污染因素和防治措施，为注射剂生产的微生物控制和降低污染提供参考。

关键词：无菌工艺；注射剂；微生物控制；微生物污染

注射剂是直接注入人体的一种剂型，不经过任何人体屏障直接进入体循环。微生物污染是影响注射剂质量的关键因素之一，关乎患者的生命安危。2006年的克林霉素磷酸酯（欣弗事件）就是典型的例子之一。安徽华源制药公司未经严格验证擅自增加灭菌柜装载量，改变灭菌温度和时间，致使产品无菌检查和热源检查均不合格，造成93例患者发生严重反应和11例死亡的药品不良事件。欣弗事件不是偶然，警醒我们在生产过程中时刻关注药品质量，关注微生物污染问题。微生物的污染来源于多方面，以下是几个主要的因素。

1 人员

人是主要的污染源，是微生物污染的关键影响因素。任何一流的厂房设计和先进的设备都离不开认为人员活动的干预，因此可以说，人员的管理水平决定着药品质量水平。国外经过试验得出：①洁净室内当工作人员穿无菌服时，静止时的发菌量一般为10～300个/min/人，躯体一般活动时的发菌量为150～1000个/min/人，快步行走时的发菌量为900～2500个/min/人。②咳嗽一次的发菌量一般为70～700个/min/人，喷嚏一次的发菌量一般为4000～60000个/min/人。③穿平常衣服时发菌量为3300～62000个/min/人。④无口罩发菌量：有口罩发菌量为（1∶7）～（1∶14）。

由上数据可知，洁净室内穿无菌衣人员的静态发菌量一般不超过300个/min/人，动态发菌量一般不超过1000个/min/人。

由此可见，人员的活动对洁净区微生物数量产生非常重大的影响，甚至是决定性的影响。要消除人员带来的污染，必须规范人员的行为和操作。

1.1相应的洁净区域 必须仅限于相关区域的生产操作人员进出，非相关区域的操作人员是不允许进入，非生产相关人员原则上禁止进出生产洁净区域。特殊情况下，参观人员，机械设备维修人员等需要进入洁净区的，必须经过严格的更衣培训，并在生产相关人员的陪同和指导下才能或许进入。

1.2人员无菌意识的培训 应对每一个员工培训微生物基础知识，洁净区基本知识，无菌药品基本知识和法规等。人的意识决定着人的行为，加强无菌意识培训，才能从源头上将污染减少到最低。

1.3人员的更衣程序 每个员工正确更衣不是一件简单的事情，里面包含很多细节性的东西。人员是活动的，更衣不合格，就会把污染带入洁净区，产品就会承受巨大的风险。很多跨国公司对更衣的要求非常严格，大多普通的员工反复练习1个月甚至更长才能达到要求，才能获准进入无菌核心区域操作。企业应该严肃对待更衣问题，差不多的思想千万要不得。

2 灭菌设备和灭菌程序

灭菌设备要选择方便验证的设备，比如方便验证布点。有很多手提式的灭菌设备既没有验证口，也不方便验证布点。这样的灭菌设备是不可控的，是绝不能使用的。灭菌程序必须要经过验证。灭菌锅的装载量，装载方式，空载满载等都要经过验证，包括微生物的挑战性实验。灭菌程序一经验证，就必须按照既定的验证程序进行，任何擅自改变都会产生无可预计的风险。

2.1装载量和装载方式 一个灭菌程序要按照既定的装载量和装载方式进行。装载量和装载的随意改变会影响灭菌气体的流通和穿透性，可能导致灭菌不彻底，产品发生污染。

2.2微生物的耐热性评估 微生物在不同的介质中耐热性能是不一样的，D值有可能存在较大波动，有可能会超过所用生物指示剂的D值。每个公司应该采集物料、环境和人员身上分离到的菌株，测定相关的D值并进行对比，才能选用最合适的验证程序。比如附着于胶塞的分离菌，其耐热性能可能高于生物指示剂（如嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂）的耐热性能，盲目的以生物指示剂为参照，就会导致灭菌不彻底，对产品质量和患者产生危害。

2.3对无菌保证的理解 欧盟灭菌决策树对湿热灭菌的F0值要求至少为8 min。这里应该理解为手段，而不是标准。F0≥8 min不一定符合药典标准，F0≤8 min不一定就不符合药典标准，关键是要对生产全过程进行必要的监控措施、灭菌前作污染菌的检查（污染菌总数及耐热性）；另外，有人将耐热性最强的芽孢接入产品中，浓度须达到106，认为只有灭菌程序能使之下降6D或12D时，此灭菌工艺才能达到标准，这是一种误解。接种进入产品的生物指示剂耐热性高，在上述浓度下将其完全杀灭所需的F0会由此变得很大。

3 清洁和消毒

现在很多厂家多采用过氧化氢、乳酸、臭氧等进行熏蒸消毒，应根据实际情况使用。不管是何种消毒方式，不能参照相关的消毒物质浓度，还需要考虑环境温度和湿度，才能发挥最好的效果。所有的消毒效果必须以验证数据为准。这里需要注意的是，生物指示剂的选择。有些厂家选择暴露的细菌芽孢生物指示剂，如枯草芽孢杆菌，而且消毒频率比较大，需要注意因此带来的污染。紫外消毒也是一种常用的有效的表面消毒方式，主要用在洁净工作台、层流罩、物流传递窗、甚至整个洁净房间。紫外线消毒需要对紫外灯的波长，使用时间和强度进行确认，才能保证消毒效果。紫外线波长为136～390 nm，消毒用的紫外灯应限制在短波的波长范围内，为200～275 nm，杀菌作用最强的波段是250～270 nm，其最强灭菌波长为253.7 nm，在操作面上的强度要求达到70 μW/cm2以上，杀菌作用随菌种不同而不同。国产紫外灯平均寿命一般为2000 h，但是其灭菌有效使用时间要依据验证而定。传递窗传递物品的装载方式也要经过验证，否则紫外消毒的效果会大打折扣。

4 物料和物品的传递方式

理想的物料区应该紧邻生产区，缩短物料的传输距离，避免污染。物料区离生产区域太远，增加转运的麻烦更增加污染的风险，在非正常天气比如梅雨季节的时候更明显。物流通道应有专用的通道，并且进和出的通道严格分开。物料进入洁净区前，表面要进行彻底的清洁和消毒，避免将污染带入无菌区域。无菌物品转移应该避免二次污染。灭完菌的物料或者物品，从灭菌设备中转移到目标区域，操作不当很容易造成二次污染。常见的如无菌原料的转运，无菌胶塞的转运，冻干成品出箱的转运（进行轧盖），都需要在层流下进行转运，人员的操作也必须要十分的仔细小心，除了不能直接接触无菌物品等最基本的要求外，应避免人体部分或者长时间暴露于层流下物料的上方或前方。

总结：注射剂生产过程中，每一个环节都是预防微生物污染不可忽视的。厂房设施的良好设计和布局，水系统，公用气体，空调系统等公用系统等，都能够产生重要的影响。人员是其中最重要的影响因素，物料的传递和转运，灭菌程序的合理验证和使用，消毒剂的交叉使用等各项细节性的东西严格遵循法规和无菌操作，能够在极大的程度上避免微生物污染，提高产品质量[1-4]。

参考文献：

[1]药品生产质量管理规范无菌附录[S].2013.

[2]白良慧，李臣武.药品生产验证指南[M].北京：人民卫生出版社，2003：74.

[3]贺国强，陈跃武，马义岭.制药工业验证实施手册[M].北京：化学工业出版社，2012：113-119.

[4]弗里德克李·卡利登，詹姆斯·艾盖洛克.无菌制药工艺的验证[M].上海：上海科学普及出版社：178-200.

编辑/张燕