马艳平， 梁志凌， 马江耀， 刘振兴， 郝　乐，柯　浩

(广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室，广东广州 510640)



罗非鱼无乳链球菌EsxA基因克隆与原核表达

马艳平， 梁志凌， 马江耀， 刘振兴， 郝乐，柯浩*

(广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室，广东广州 510640)

摘要：Ⅶ型分泌系统(T7SS)是近年来发现的分泌系统，分泌两种胞外蛋白,EsxA基因编码的ESAT6蛋白和EsxB基因编码的CFP-10蛋白。分泌蛋白具有良好的免疫原性，促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响巨噬细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能，与致病性密切相关。以罗非鱼源无乳链球菌为模板，克隆到294 bp的EsxA基因，将目的序列克隆到pMD18-T载体，经测序，目的序列与无乳链球菌EsxA基因同源率在99%以上。EsxA基因克隆到pET32a载体中，重组载体在28℃、0.5 mmol/L IPTG诱导条件下表达量最大，可溶性表达。将纯化的ESAT6蛋白免疫Balb/c鼠，成功制备ESAT6蛋白鼠多克隆抗体，经Western blot，ESAT6蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步进行无乳链球菌ESAT6蛋白的免疫学功能研究奠定了基础。

关键词：Ⅶ型分泌系统；无乳链球菌；EsxA基因；克隆与表达

Ⅶ型分泌系统(type Ⅶ secretion system, T7SS)由多种组分构成，分泌两种具有免疫原性的胞外蛋白，即EsxA基因编码的早期分泌抗原靶6(earlier secreted antigen target 6，ESAT6)和EsxB基因编码的培养滤液蛋白10(culture filter protein 10, CFP-10)。它们具有良好的免疫原性，能改变宿主细胞信号传导、促进细菌从巨噬细胞吞噬体逃逸、影响细胞凋亡及裂解细胞等生物学功能，与致病性密切相关。分支杆菌属细菌、金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌等细菌Ⅶ型分泌系统分泌蛋白功能已有文献报道[1-4]。……