范才良，雒　茂，李　慧，晏升勇，李阳春

（1.重庆市荣昌区畜牧兽医局，重庆荣昌　402460；2.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆荣昌　402460；3.重庆市荣昌区清江镇畜牧兽医站，重庆荣昌　402466；4.重庆澳龙生物制品有限公司，重庆荣昌　402460）



羊棘球蚴病疫苗免疫山羊后的抗体水平检测

范才良1，雒茂2，李慧2，晏升勇3，李阳春4

（1.重庆市荣昌区畜牧兽医局，重庆荣昌402460；2.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆荣昌402460；3.重庆市荣昌区清江镇畜牧兽医站，重庆荣昌402466；4.重庆澳龙生物制品有限公司，重庆荣昌402460）

摘要：棘球蚴病又叫包虫病，是人和动物感染细粒棘球绦虫及多房棘球绦虫幼虫所致的疾病。本试验采用不同的免疫程序分两次免疫羊包虫病疫苗，并于免疫后4、8、12、20、28、42周分别采集血清用间接ELISA法检测抗体水平。结果显示：首次免疫后4周抗体水平达到最高并维持一定时间，第28周抗体水平处于临界值；两次免疫的羊在42周时的抗体阳性率仍达到88.9%。

关键词：羊细粒棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗；羊包虫；人畜共患病；免疫效果

棘球蚴病又叫包虫病，是人和动物感染细粒棘球绦虫幼虫所致的疾病。本试验用羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗对试验羊进行了不同免疫程序的免疫，然后用间接ELISA法检测不同时期的血清抗体水平，现将结果报告如下：

1　材料与方法

1.1主要药品羊棘球蚴（包虫）病基因工程亚单位疫苗（重庆澳龙生物制品有限公司生产，疫苗批号：20140201）；羊棘球蚴（包虫）ELISA抗体检测试剂盒（重庆澳龙生物制品有限公司生产，生产批号：120150402）。

1.2主要仪器PhysioCare多导移液器，Concept移液器，LRH-250生化培养箱，Mu1tiskan MK3酶标仪，XK96-A/B快速混匀器。

1.3试验动物2月龄以上临床检查健康，包虫病抗体检测呈阴性的羊30只。

1.4试验分组从荣昌县铜鼓、吴家镇三个养殖户家中各选取试验羊10只，共30只。试验组1随机取三个养殖户各5只羊，共15只；试验组2为余下的15只羊。

1.5免疫程序及操作方法试验1、2组每只羊均注射1mL（1头份）羊包虫疫苗，并作好记录。间隔4周后对试验组2进行二次免疫注射，试验组1不再免疫。操作方法：每只试验羊颈部皮下注射1头份。

1.6被检血清的采集免疫后4周（二免前）、8、12、20周分别对试验羊进行颈部静脉采血，分离血清、统一编号后送实验室冷冻保存备检。血清采集情况详见表1、表2。

1.7血清免疫抗体的测定用间接ELISA法检测抗体水平，操作方法参见ELISA试剂盒说明书。结果判定标准如下：

1.7.1试验结果同时满足下列条件，方为有效：标准阳性对照孔平均OD450nm≥0.6±0.02；标准阴性对照孔平均OD450nm≤0.3±0.02。

表1　一免后被检血清采集表　份

表2　二免后被检血清采集表　份

1.7.2疫苗免疫后抗体水平检测结果判定：样品OD450nm≤0.3，判为细粒棘球蚴（包虫）抗体阴性；样品OD450nm>0.3，判为细粒棘球蚴（包虫）抗体阳性。

2　试验结果

试验组1和2的抗体检测结果、抗体阳性率和抗体消长情况详见表3～表6和图1。

表3　试验组1（一免）抗体检测结果

表4　试验组2（二免）抗体检测结果

表5　试验组1抗体检测阳性率

3　结果分析

3.1抗体水平分析由表3可知，进行一次免疫的羊在第4周时抗体水平达到最高值（0.558），此后抗体水平逐渐下降，第20周时为0.361，第28周（0.294）已低于临界值0.3，抗体为阴性，截至第42周抗体水平降为0.254。由表4可知，进行二次免疫的羊在第8周时抗体水平达到最高值（1.452），第12周～20周时的抗体水平均在1.0以上，第28周时为0.890，截至第42周最后一次采血时其抗体水平已降为0.620。由图1可知，用该包虫疫苗进行二免后其抗体水平明显高于一免的抗体水平。

表6　试验组2抗体检测阳性率

图1　两个试验组抗体水平的消长情况

3.2抗体阳性率分析由表5可知，一次免疫的羊在第4周时抗体阳性率为88.9%，第8周时为77.8%，第12周时为66.7%，第20周时为55.6%，第28周时为44.4%，第42周时抗体降为0。由表6可知，二次免疫的羊在第4周时抗体阳性率为88.9%，第8周～28周时的抗体阳性率均为100%，第42周时抗体阳性率为88.9%。由此可见，二次免疫的保护效果比一次免疫的保护效果更好。

3.3包虫病疫苗的作用原理包虫病疫苗是使用DNA重组生物技术，把能表达棘球绦虫Eg95蛋白的基因定向导入大肠杆菌，通过细菌发酵表达Eg95蛋白，经破碎纯化提取Eg95蛋白而制成的基因工程亚单位疫苗[2]。该疫苗具有产品质量稳定、不含感染性物质、生物安全性高、免疫效果好等特点。生产上于该疫苗中加入了免疫佐剂Qui1 A（皂素的纯化物），对疫苗有免疫增强作用，从根本上解决了免疫效果差的问题[3-4]。

4　包虫病的危害

4.1对人的危害包虫病是人兽共患疾病，对人的危害很大。一是寄生于肝、肺、骨骼、脑部，产生机械性压迫损害引起腹疼、呼吸困难，易发骨折和癫痫等症状；二是在虫体生长发育过程中不断释放抗原及毒性物质，使机体产生一系列中毒症状；三是当包囊破裂或囊液外漏入周围组织和体腔时，大量原头蚴种植于组织器官引起继发性包虫病；四是该病一旦在体内发生可以终身存在，因为包虫形成囊膜后药物难以进入囊内根治，常常需要手术摘除，如果摘除不完全容易复发。该病最终以慢性消耗为主，使患者丧失劳动力，长期经受病痛折磨。

4.2包虫病对动物的危害消耗动物体内的营养物质，造成机械损伤，饲料利用率下降，导致动物生长缓慢，抵抗力下降，最终影响生产性能和畜产品质量。

5　结论

该包虫病疫苗对羊的棘球蚴感染具有很好的免疫保护效果，且经两次免疫注射后产生的抗体水平更高，抗体持续时间更长。因此，生产实践中应在首次免疫后适时进行二次免疫。

参考文献：

[1]张先军.包虫病危害与预防[J].畜牧兽医杂志，2012，31 （1）：114-116.

[2]Lightow1ers M W，Lawrence S B，Gauci C C，et a1.Vaccines against hydatidosis using a defined recombinant vaccine antigen[J].Parasite Immuno1，1996，18 （9）：457-462.

[3]A11ison.The mode of action of immuno1ogica1 adjuvants[J].Dev Bio1 Stand，1998，92：3-11.

[4]Frederick R.Improving vaccine performance with adjuvants[J].C1in Infect Dis，2000，30（S3）：266-227.

Detection of the Antibody Levels after Immuned Hydatid Disease Vaccine in Goats

FAN Cai1iang1，LUO Mao2，YAN Shengyong3，et a1.
（1.Anima1 Husbandry and Veterinary Bureau of Rongchang District，Chongqing Rongchang 402460；2.Department of Veterinary Medicine，Rongchang Campus of Southwest University，Chongqing Rongchang 402460；3.Anima1 Husbandry and Veterinary Station of Qingjiang Town in Rongchang District，Chongqing Rongchang 402466；4.Chongqing Au1eon Bio1ogica1s Co.Ltd.，Chongqing Rongchang 402460，China）

Abstract：Hydatidosis was caused by the 1arvae of E.granulosus and E.multilocularis on the human and anima1s.In this experiment，two different immunization program were conducted（once immunization，twice immunization）after 4、8、12、20、28、42 th weeks，serum antibody 1eve1s were detected by ELISA method.The resu1ts showed that once immunization’s antibody reached to the highest after 4th weeks and maintained a certain time，the antibody 1eve1's critica1 va1ue appeared at 28th weeks.Twice immunization's antibody positive rate was 88.9% at 42th weeks.

Key words：Recombinant hydatid subunit vaccine；Zoonosis；Immune effect

作者简介：范才良（1967—），男，四川隆昌人，高级兽医师，从事预防兽医、临床兽医、中草药研究。

收稿日期：2015-09-25

中图分类号：S852.52

文献标识码：B

文章编号：1001-8964（2016）02-0035-03