李继友（天津渤海职业技术学院，天津300400）

基于p21启动子报告基因系统的构建及应用

李继友
（天津渤海职业技术学院，天津300400）

本研究通过构建p21启动子报告基因系统，进行筛选能够上调p21表达的有效中药制剂，最终阐明其基本抗肿瘤机理。

启动子；报告基因系统；构建

p21基因是重要的肿瘤抑制基因p53的靶基因，在细胞受内外环境胁迫的情况下，转录因子p53蛋白表达量升高，p53可以调节大量蛋白的表达，从而使细胞周期阻滞在G1/S期。p21可以以p53依赖和非依赖的方式表达升高，p21可以结合细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2和CDK4/6，抑制细胞周期进程。多种放疗和化疗药物治疗肿瘤的机制就是诱导肿瘤细胞内p21表达升高，进而抑制细胞增殖，从而抑制肿瘤生长。

中药是我们国家的瑰宝，许多药物已经被用于治疗不同类型的肿瘤，取得了良好的效果。但是其治疗肿瘤的机制不明，限制了其应用和发展。我们构建了p21启动子报告基因系统，用于筛选能够上调p21表达的有效中药制剂，进而阐明其抗肿瘤机理。

1材料与方法

1.1主要试剂

DMEM培养基（Gibco公司），胎牛血清（Hy⁃clone公司），Lipofectamine 2000（Invitrogen公司），G418（Calbiochem公司），反转录试剂盒及荧光素酶单报告检测系统试剂盒（Promega公司），PCR反应中的Premix ExTaq和DNA Marker（Takara公司）。

1.2实验方法

1.2.1细胞培养

本论文中所用到的细胞系包括人胚肾细胞系293和宫颈癌细胞HeLa均购于中国科学院上海细胞研究所细胞库。细胞用含10%胎牛血清、100μ g/ mL链霉素的DMEM（Hyclone）培养基，于37℃、5% CO2培养箱中培养，采用含0.02%EDTA的胰酶消化细胞并进行传代[1]。

1.2.2质粒构建

WWP-Luc-1由Vogelstein博士(Johns Hopkins University, Baltimore, MD)提供[2]，它包含有2.3kb的p21启动子片段，利用HindIII单酶切后连入pGL3-Enhancer载体上。……