宋玉财，李鹏，王彬，王官晓，唐丽华，梁雪，于小川

（1.山东省烟台市动物卫生监督所，山东 烟台 264000；2.烟台市牟平区龙泉镇兽医站，山东 烟台 264112；3.莱阳市畜牧兽医局，山东 烟台 264003）

L A MP技术在家禽病毒病检测中的应用

宋玉财1，李鹏2，王彬1，王官晓1，唐丽华3，梁雪3，于小川1

（1.山东省烟台市动物卫生监督所，山东 烟台 264000；2.烟台市牟平区龙泉镇兽医站，山东 烟台 264112；3.莱阳市畜牧兽医局，山东 烟台 264003）

环介导等温扩增技术（LAMP）是由Notomi等建立的一种核酸扩增技术，该方法最大的优点是能够在63～65℃的等温条件下扩增特定DNA序列,并在30～60min内可以观察到结果。LAMP已经成功用于许多病毒的检测，在本文中，主要概述LAMP技术原理及其在家禽病毒病检测中的应用。

LAMP技术；环介导等温扩增技术；家禽病毒病

1 LAMP技术原理

1.1 LAMP引物相关 LAMP反应需要4条引物，分别针对靶序列上6个不同位置，包括一对外引物F3、B3，另外一对为内引物FIP（Forward inner primer）和BIP（Backward inner primer）。FIP由F1C区和F2区构成，BIP由B1c区和B2区构成[1]。图1为各引物所在位置示意图。

图1 LAMP引物位置示意图

引物设计是LAMP反应成功与否的关键，现在通常使用日本荣研株式会社的在线LAMP引物设计程序 PrimerExplore（http://www.primerexplorer. jp/e/）完成设计工作，Tm值、引物末端稳定性、GC含量、二级结构和引物间距等几个方面都会影响到引物的品质。之后的报道证实在添加一对环状引物后，可缩短大约一半的LAMP反应时间。

1.2 LAMP反应扩增原理 在LAMP反应的开始，FIP引物中的F2片段首先与模板F2c区互补结合，在Bst DNA聚合酶作用下，由模板链的3'端向5'端延伸，而后F3引物与模板的F3c结合，因为Bst DNA聚合酶具有链置换的功能，沿着F3引物扩增出的新链将之前的互补链置换下来。……