周 虎，汤 锋， 庞明泉，万陈飞，樊海宁，4，阳丹才让，4*，邓 勇，4**

(1.青海大学附属医院肝胆胰外科，青海 西宁 810001；2.青海大学医学院高原医学研究中心，青海 西宁 810001；3.青海大学高原人畜共患病研究所，青海 西宁 810001；4.青海省包虫病研究重点实验室)

多房棘球蚴重组蛋白CTB-Emy162的原核表达及分离纯化#

周 虎1，3，汤 锋2，3，4， 庞明泉1，3，万陈飞1，3，樊海宁1，3，4，阳丹才让1，3，4*，邓 勇1，3，4**

(1.青海大学附属医院肝胆胰外科，青海 西宁 810001；2.青海大学医学院高原医学研究中心，青海 西宁 810001；3.青海大学高原人畜共患病研究所，青海 西宁 810001；4.青海省包虫病研究重点实验室)

目的 构建融合基因CTB-Emy162原核表达系统，纯化得到多房棘球蚴重组蛋白CTB-Emy162。方法 根据多房棘球蚴抗原Emy162在GenBank中的序列，用生物信息学软件OptimumTMCodon 优化密码子适应指数(CAI)、最优密码子频率(FOP)及GC含量从而获得适合大肠杆菌BL-21表达的Emy162基因序列。PCR扩增Emy162基因，定向在pET-28a-CTB的CTB基因5′端插入Emy162基因。构建CTB和Emy162双基因原核表达质粒pET28a-CTB-Emy162，将该质粒转化于E.coli BL-21(DE3)中，经IPTG诱导蛋白表达后，利用Ni-NTA 柱亲和层析及离子交换色谱纯化后获得目的蛋白。结果 OptimumTMCodon 获得优化后的Emy162序列，经生物公司测序及酶切鉴定结果证明重组质粒pET28a-CTB-Emy162构建成功，进一步实验结果表明CTB-Emy162在原核表达系统pET-28a中主要以包涵体形式存在，在可溶部位少量表达。继而经Ni-NTA柱亲和纯化及离子交换色谱纯化获得CTB-Emy162纯蛋白。结论 以大肠杆菌E.coli BL-21(DE3)及pET-28a构成的原核表达系统能够成功表达重组蛋白CTB-Emy162，Ni-NTA纯化柱能够纯化目的蛋白CTB-Emy162。

多房棘球蚴 Emy162 原核表达系统

包虫病(echinococcus)是一种人兽共患性寄生虫病。……