陈娇 时冉冉 常陆林

（漯河医学高等专科学校生化教研室 河南漯河 462002）

亮菌多糖对肿瘤免疫效应机制的研究

陈娇 时冉冉 常陆林

（漯河医学高等专科学校生化教研室 河南漯河 462002）

亮菌是一种从发光柳树朽木上的提取出来的一种菌，又称假蜜环菌。而亮菌多糖则是亮菌在生长代谢的过程中产生出来的一种物质，然而，很多相关报道称亮菌多糖对肿瘤具有一定的免疫作用，因此，文章针对亮菌多糖对肿瘤细胞的研究，通过具体的试验方法，应用一些现代生物技术、细胞生物学以及免疫学等知识，对亮菌多糖具有肿瘤免疫效应机制进行深入研究，从而能够为亮菌多糖在肿瘤免疫机制中的应用和研究提供一种理论参考。

亮菌多糖 肿瘤 免疫效应 研究

1 肿瘤以及多糖的现状

在当今社会上，肿瘤已经成为一种极其常见严重的疾病，根据全世界的统计，大约有7600万的肿瘤患者生活在这个世界上，并且以每年增加700万的肿瘤患者的情况，全世界由于肿瘤引起的死亡人数占600万，占死亡总人数的12%，在我国，死于肿瘤人数占死亡人数的21.58%。当今社会治疗肿瘤的方法主要有化疗、放疗以及手术治疗等，但是采用这些方法在杀死肿瘤细胞的同时也对人体的正常细胞具有很大程度上的损害，尤其是人体的免疫功能以及造血功能。因此，一种新型的免疫疗法得到了广泛的应用，它可以通过提高人体的免疫效应机制进行抑制杀死肿瘤细胞的生长。

多糖是一种天然的高分子化合物，广泛的存在于动物的细胞膜以及植物的细胞壁等。在20世纪的50年代，很多生物医学家发现多糖具有抗肿瘤的作用，很多研究表明，多糖对正常细胞的损坏小，对肿瘤细胞的作用较强，有些多糖对肿瘤细胞的抑制率能够达到100%。而本文主要研究的多糖是亮菌多糖对肿瘤免疫效应机制的作用，主要通过具体试验采用DEAE离子交换柱的方法纯化亮菌多糖，测定硫酸基含量、红、紫外线的扫描等证明亮菌多糖对肿瘤免疫机制。

2 实验方法

2.1 亮菌多糖的提取

2.1.1 亮菌的培养

（1） 液体种子的培养方法：事先要准备好100ml的液体种子的培养基，把斜面菌种匀浆后并且按照5%的接种量加入到液体培养基中进行培养，培养温度要在26摄氏度，150rpm条件下振荡性的培养7天。

（2） 液体发酵的培养：2/5的装液量，并且按照5%的接种量把上面的液体种子加入摇瓶中，发酵的温度控制在26摄氏度，150rpm振荡培养5天。

2.2 实验中的动物分组

在无菌的条件下取得传代6d的S肉瘤细胞的悬液，通过加入一定量的生理盐水对细胞悬液进行稀释，对每一只小鼠在腋下进行接种0.2mL，然后再24h后，在进行随机分组：对于亮菌多糖组的小鼠要按照每天0.1ml/10g的体重要求在它们的腹腔内注射一定量的亮菌多糖，另外一个正常对照组的小鼠注射一定的生理盐水，对接种肿瘤后一般情况下是12天后分别对不同组的小鼠进行以下实验。

2.3 对S肉瘤的抑制作用

对于用于实验的小鼠采用劲椎脱臼法致死，把它们的肿瘤块、胸腺以及脾脏等用电子称它们的重量。最后计算肿瘤的抑制率、胸腺指数以及脾指数用生物统计的方法进行处理解决。

2.4 对NK细胞杀伤活性的测定

2.4.1 NK细胞的获取

对于用于实验采用劲椎脱臼法致死的小鼠，在无菌的条件下取出它们的脾脏，以便制备一个单个脾细胞，并且要加入0.4ml的双蒸水缓慢的振荡30s，之后就是以最快的速度加入到0.4ml的双倍生理盐水中，从而能够使得溶液等渗，在对液体进行离心10min，使得细胞沉淀重悬于一种含有10%的小牛血清的培养液中，最后就得到的就是备用的N K细胞。

2.4.2 靶细胞的获取

传代培养的L929细胞在实验的过程中使用的是0.25%胰蛋白酶一般都是消化1至2min ，之后就是加入完全1640培养液进行缓慢的吹打细胞，并且以2000rpm离心5min，最后把沉淀细胞重悬于1640培养液中，就是备用的NK细胞的靶细胞。

2.4.3 对NK细胞的活性进行测定

把事先准备好的靶细胞悬液加入每个孔是0.1ml的96孔板中，并且在培养箱内进行培养1h，每个孔中都有加入0.1ml的效应细胞，加入靶细胞1640培养液0.1ml，再分别设置4个复孔，在培养24h后倒出上清液，对每个孔加满生理盐水，重复两次，在加入0.1ml的0.1%的中性红染液，在37摄氏度条件下进行培养30min，之后用生理盐水弃去染液，最后在每个孔内都加入0.1ml的细胞溶解液，测量光密度值，并且记录下来OD值。

3 实验结果分析

根据实验测量数据分析亮菌多糖组的小鼠肿瘤的生长速度相对比较缓慢，并且剥离出来的肿瘤体是一个完整的组织，在肿瘤周围并没有出现流血以及水肿的现象，并且精神状态以及食欲都相对比较好，由此可以看出，亮菌多糖对S肉瘤具有很好的抑制作用，抑制率为44.22%。

除此之外，根据实验数据表明，移植肿瘤S之后小鼠的脾脏会相应的变大，进而脾指数也相对升高，而且胸腺出现了严重萎缩的情况，胸腺指数也会相应减小，最终导致免疫功能下降，而在亮菌多糖那组的小鼠脾指数则属于正常，大概下降了35%，具有显著性的差异，由此可见，亮菌多糖对胸腺具有一定的保护作用，可以抑制肿瘤对免疫器官的伤害。

结语：

根据以上实验分析，对亮菌多糖具有一定的深入了解，随着现代生物技术以及医学技术的不断发展，在对肿瘤方面采用的一些比较有效的治疗方法得到了越来越广泛的应用。文章通过对小鼠加以试验研究，根据最后测量出的相关数据进行分析，实验结果表明亮菌多糖对肿瘤的免疫治疗机制确实具有一定的积极作用，可以很好的抑制肿瘤细胞的生长，并且对正常细胞的生长没有严重的损坏，对人体的免疫功能具有一定的保护作用。

［1］万佐玺，秦恩华，周光来.魔芋中水溶性多糖的提取［J］. 湖北民族学院学报（自然科学版）. 2004（04） .

［2］叶凯贞，黎碧娜，王奎兰，谭志伟.多糖的提取、分离与纯化［J］. 广州食品工业科技. 2004（03）.

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1674-2060（2016）02-0313-01

陈娇（1988-），女，汉族，河南漯河，漯河医学高等专科学校，研究方向：生物化学与分子生物学。