脂肪氧合酶高效制备关键技术研究

脂肪氧合酶（Lipoxygenase，LOX，EC1.13.11.12）属于氧化还原酶，是一类含有非血红素铁的蛋白质，能够专一催化氧化含有Z，Z-1，4-戊二烯结构的多元不饱和脂肪酸，形成具有共轭双键的脂肪酸氢过氧化物的双加氧酶，可作为面粉增白剂和增香剂、抗肿瘤药物前体、涂料与洗涤剂等生产原料，具有巨大的市场需求。由于商品化的LOX主要通过大豆浸提获得，受大豆来源的影响，产品批次间的性质差异较大，不利于下游产品的开发和应用。

近年来，随着LOX应用领域的拓展，国内外科学家等通过分子改造、高产菌构建及发酵过程优化的研究，以获得应用性能优良的LOX并实现其高效生产。Cristea，M（2005）研究在毕赤酵母中表达含锰的脂肪氧合酶和推定金属配体的定点突变；Bae，JH（2010）从铜绿假单胞菌PR3中发现了一种新的热稳定的LOX。其被纯化了34.3倍，复得率为5.14%，纯化后酶的Km和Vmax值分别为3 57 mmol/L和0 73 mu mol/min//mg。María等（2012）克隆了西兰花基因组中的脂肪氧合酶（BoLOX1）基因，序列分析显示BoLOX1和其他高等植物脂肪氧合酶相似，并分析了该基因的表达，结果表明BoLOX1在植物采后衰老过程中有较大提高。 María等（2012）克 隆 了 橄 榄 脂 肪 氧 合 酶c DNA（Oep2LOX1），并对光照、温度、损伤对脂肪氧合酶在橄榄果表皮中的表达的影响进行了研究。国内的江南大学、南京农业大学等在脂肪氧合酶高效制备技术上进行了深入的研究。如：CN201310287699.X公开了一种热稳定脂肪氧合酶突变体及其构建方法，通过PCR法分别对脂肪氧合酶的盖子结构201-TQRGQG-206进行G204P、G206P、G204P/G206P 及L6loop→PT linker突变，并得到具有热稳定性的脂肪氧合酶。……