袁 杰， 刘道芳（.安徽省食品药品检验研究院，安徽合肥3005；.安徽安科余良卿药业有限公司，安徽合肥30088）



接骨灵贴膏质量标准的研究

袁 杰1， 刘道芳2
（1.安徽省食品药品检验研究院，安徽合肥230051；2.安徽安科余良卿药业有限公司，安徽合肥230088）

摘要：目的 建立接骨灵贴膏（当归、骨碎补、续断等）的质量标准。方法 TLC法对接骨灵贴膏中的当归进行定性鉴别；GC法对其中冰片、樟脑、桉油精和水杨酸甲酯的含有量进行测定。结果 薄层色谱斑点清晰分离度良好，无阴性干扰。冰片、樟脑、桉油精和水杨酸甲酯的回收率（n＝6）分别为96.7%（ISD＝3.1%）、96.8%（ISD＝1.3%）、96.4%（ISD＝1.6%）和98.4%（ISD＝1.4%）。结论 TLC法和GC法能有效监控接骨灵贴膏的质量。

关键词：接骨灵贴膏；当归；冰片；樟脑；桉油精；水杨酸甲酯；TLC；GC

KEY W 0RDS：Jiegu1ing Emp1astrum；Angelicae Sinensis Radiχ；borneo1；camphor；cineo1；methy1 sa1icy1ate；TLC；GC

接骨灵贴膏最初收载于卫生部药品标准中药成方制剂第十三册［1］中，由骨碎补、续断、土鳖虫、羌活、天南星、乳香、没药、当归、桃仁、五加皮、蒲公英、红花、冰片、樟脑、水杨酸甲酯、桉油（主要成分为桉油精）16味药材组成，经煎煮、渗漉、涂膏、盖衬等工艺，切成小块而得，可活血化瘀，舒筋通络，消肿止痛，主要用于各种闭合性新骨折、跌打损伤、扭挫伤等软组织损伤。前期曾有关于接骨灵贴膏质量标准的文献报道，对其中羌活、蒲公英、樟脑等成分进行了定性鉴别试验，并对骨碎补中的柚皮苷进行了含有量测定［2］，但部颁标准中只有“鉴别”和“含膏量”等简单的项目。考虑到贴膏剂制备过程中的特点，为了保证临床疗效，本实验制定了当归的薄层色谱（TLC）鉴别方法，并采用气相色谱（GC）法对其中易挥发的冰片、樟脑、桉油精、水杨酸甲酯进行含有量测定，以建立较全面的质量标准。

1 仪器、试剂与试药

岛津GC-2014C气相色谱仪，包括氢火焰离子检测器、GC So1ution色谱工作站（日本岛津公司）。毛细管色谱柱以聚乙二醇20000（PEG-20M）为固定相（柱长30 m，内径0.53 mm，膜厚度0.5 μm）。硅胶G薄层板（青岛海洋化工有限公司、烟台大学生物科学与工程研究所、德国Merck公司）；薄层成像文件系统（瑞士CAMAG公司）。

内标环己酮（批号111674-200401）、冰片（批号110743-200504，供含有量测定用）、樟脑（批号110747-201008，纯度99.0%）、桉油精（批号110788-201004，纯度99.6%）和水杨酸甲酯（批号110707-201011，纯度99.9%）对照品（中国食品药品检定研究院）。所用试剂均为分析纯。接骨灵贴膏（批号20140901、20140902、20140903，安徽安科余良卿药业有限公司）。

2 TLC法鉴别接骨灵贴膏中的当归

2.1 供试品溶液制备 取本品5片，加三氯甲烷40 mL，不时振摇以使贴膏脱膏，倾取膏液，加甲醇30 mL，边加边搅拌，离心5 min，取上清液，低温蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，离心（10 000 r/min）2 min，取上清液，即得。

2.2 对照品溶液制备 取当归药材0.5 g，加乙醇10 mL，超声10 min，滤过，滤液即为对照品溶液。2.3 阴性对照溶液制备 取原药材适量，按处方制得缺当归的阴性样品，按“2.1”项下方法制得阴性对照溶液。

2.4 TLC鉴别 吸取供试品、对照品、阴性对照溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果，供试品色谱在与对照品相应的位置上，呈相同颜色的荧光斑点，而阴性对照品在相应的位置无斑点。由此可知，该方法阴性对照无干扰，可以用于鉴别当归，见图1。

3 冰片、樟脑、桉油精、水杨酸甲酯含有量测定

3.1 色谱条件 聚乙二醇20000（PEG-20M）毛细管柱（柱长30 m，内径0.53 mm，膜厚度0.5 μm）。进样口温度230℃；检测器温度240℃；氮气体积流量2 mL/min，氢气40 mL/min，氧气400 mL/min；程序升温（初始90℃，保持4 min，以6℃/min的速率升至170℃，保持10 min。理论塔板数按樟脑峰计算，应不低于10 000。

3.2 溶液制备方法

图1 接骨灵贴膏中当归的薄层色谱图Fig.1 TLC chromatogram s of Angelicae Sinensis Radiχ in Jieguling Em plastrum

3.2.1 对照品溶液制备 精密称取环己酮适量，加乙酸乙酯制成每1 mL含25 mg样品的溶液，作为内标溶液。另取樟脑25 mg、冰片5 mg、桉油精6 mg和水杨酸甲酯12.5 mg，置同一25 mL量瓶中，精密加入内标溶液1 mL，加乙酸乙酯溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。

3.2.2 供试品溶液制备 取本品5片，剪成小块，除去盖衬，置1 000 mL烧瓶中，连接挥发油测定器，自测定器上端加水400 mL，使水充满刻度部分，再加乙酸乙酯4 mL，加热回流2 h，放冷，分取刻度中的乙酸乙酯，挥发油测定器用适量乙酸乙酯洗涤，合并乙酸乙酯液。通过铺有2 g无水硫酸钠的漏斗，转移至25 mL量瓶中，精密加入内标溶液1 mL，再加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。3.2.3 阴性对照溶液制备 按处方量制成缺樟脑、冰片、桉油精、水杨酸甲酯的阴性对照品，按“2.1”项下方法操作，即得。

3.3 含量测定的专属性试验 分别精密吸取“3.2”项下对照品、供试品和阴性对照溶液各1 μL，注入气相色谱仪中，记录色谱图，见图2。由图可知，在供试品色谱中，呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，而阴性对照溶液色谱中未呈现，并且无干扰物质。

图2 GC色谱图Fig.2 GC chromatograms

3.4 线性关系考察 精密称取环己酮适量，加乙酸乙酯制成每1 mL含10 mg样品的溶液，作为内标溶液。精密称取樟脑62.01 mg、冰片46.51 mg、桉油精21.89 mg和水杨酸甲酯对照品33.38 mg，置于同一25 mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解，制成混合对照品溶液。分别精密吸取0.5、1、2、3、5、 8 mL混合对照品溶液，置于10 mL量瓶中，精密加入内标溶液1 mL，加乙酸乙酯溶解，并稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取1 μL，注入气相色谱仪，记录色谱峰。以对照品质量浓度与内标质量浓度的比值为横坐标（X），峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标（Y）进行线性回归，得到接骨灵贴膏中4种成分的标准曲线方程、相关系数（r）和线性范围，结果见表1，表明四者在一定质量浓度范围内均有良好的线性关系。

表1 接骨灵贴膏中4种成分的线性关系Tab.1 Linear relationships of four consituents in Jieguling Em p lastrum

3.5 精密度试验 取“3.4”项下混合对照品溶液，连续进样5次，测定峰面积，计算校正因子。结果，樟脑ISD为0.56%、冰片ISD为0.51%、桉油精ISD为0.76%、水杨酸甲酯ISD为0.65%，表明仪器精密度良好。

3.6 重复性试验 精密称取同一样品（批号20140901）6份，按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，进行测定。结果，樟脑平均含有量3.675 mg/片，ISD为0.83%；冰片1.068 mg/片，ISD 为0.98%；桉油精0.823 mg/片，ISD为1.03%；水杨酸甲酯1.324 mg/片，ISD为0.49%，表明该方法重复性良好。

3.7 稳定性试验 精密称取同一样品（批号20140901）1份，按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别在0、1、2、4、8、12 h进样1 μL，测定峰面积。结果，樟脑的峰面积ISD为0.34%，冰片为0.65%、桉油精为0.97%、水杨酸甲酯为0.79%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

3.8 加样回收率试验 取含有量已知的样品（批号20140901，樟脑3.675 mg/片，冰片1.068 mg/片，桉油精0.823 mg/片，水杨酸甲酯1.324 mg/片）6份，各2片，除去盖衬，剪成小块，置于1 000 mL烧瓶中，加水300 mL，加入混合对照品溶液（含7.654 mg/mL樟脑、2.142 mg/mL冰片、1.763 mg/mL桉油精、2.578 mg/mL水杨酸甲酯）1 mL，按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，吸取1 μL，注入气相色谱仪，计算回收率，结果见表2。

3.9 含有量测定 取3批样品，按上述方法进行分析测定，结果见表3。

表3 含有量测定结果Tab.3 Results of content determ ination

4 讨论

樟脑、冰片、桉油精和水杨酸甲酯是在基质融化（70℃左右）时加入，根据样品的测定数据可以发现，樟脑、冰片、桉油精和水杨酸甲酯等成分有一定程度的挥发。另外，批间的差异性较小，说明工艺较稳定，加上临床使用多年，疗效确切，故可以认为处方和工艺较合理［3］。

同时，对以上4种成分进行含有量测定，由于篇幅所限，没有把缺每味药的阴性对照图谱一一列出，而在实验中分别作了缺单味药材的阴性对照，结果证明均无干扰［4-14］。而且，采用了《中国药典》2010版一部挥发油测定的方法，应注意各部件装配的严密性问题，不能有漏气现象，否则测定结果不准确［15］。

表2 加样回收率试验结果Tab.2 Results of recovery tests

接骨灵贴膏中的冰片使用的是合成龙脑，为左旋和右旋龙脑的混合物，在气相色谱中出现两个峰，故以两峰的峰面积之和来计算其含有量。

该制剂由16味药组成，本实验还对骨碎补、羌活、乳香、没药等进行了薄层色谱研究。结果发现，骨碎补、羌活阴性样品有干扰，而乳香、没药的薄层结果没有找到专属性强的斑点，因此无法准确进行鉴别。

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［15］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：2010年版一部［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：附录63.

［成分分析］

Quality standard for Jieguling Em plastrum

YUAN Jie1， LIU Dao-fang2

（I.Anhui Provincial Institute for Food and Drug Control，Hefei23OO5I，China；2.Anhui Anke Yuliangqing Pharmaceuticl Co.，Ltd.，Hefei23OOSS，China）

ABSTRACT：AIM To estab1ish a qua1ity standard for Jiegu1ing Emp1astrum（Angelicae Sinensis Iadix，Drynariae Rhizoma，Dipsaci Radiχ，etc.）.METH0DS A.Sinensis in Jiegu1ing Emp1astrum was identified by TLC. The contents of borneo1，camphor，cineo1and methy1 sa1icy1ate in this preparation were determined by GC.RESULTS The c1ear TLC spots showed good reso1ution without interference from negative samp1es.The average recoveries（n＝6）of borneo1，camphor，cineo1 and methy1 sa1icy1ate were 96.7%（ISD＝3.1%），96.8% （ISD＝1.3%），96.4%（ISD＝1.6%）and 98.4%（ISD＝1.4%），respective1y.C0NCLUSI0 N TLC and GC can be app1ied tomonitoring the qua1ity of Jiegu1ing Emp1astrum.

作者简介：袁 杰（1974—），男，硕士生导师，研究方向为中药材及中成药质量分析。Te1：13865959337，E-mai1：dsyuanjie@ 126.com

收稿日期：2015-06-23

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.020

中图分类号：I927.2

文献标志码：A

文章编号：1001-1528（2016）03-0575-04