李连坤　张蕾　王甜甜　王雪　张雯娜　蔡广知　贡济宇

[摘要] 目的 建立阿尼西坦缓释片体内代谢产物N-对甲氧基苯甲酰氨基丁酸（ABA）含量的测定方法。 方法 采用反相高效液相色谱法（HPLC法）测定ABA含量，Phenomenex ΜP-ODS C18色谱柱（250×4.6 mm，5 μm），流动相：乙腈∶0.1%醋酸=25∶75，检测波长：250 nm，柱温：35 ℃。 结果 以氯仿∶甲醇为2∶8，涡旋振荡30 s，离心10 min，于40℃下氮气吹干处理血样。在67.5～2150 μg/L范围内线性关系良好，回收率为86.67%～93.58%，均在85%以上，符合实验要求。主要药代动力学参数为：阿尼西坦缓释片的AΜC0-t为（342.13±110.23）μg/（min·ml），Cmax为（7.41±2.05）μg/ml，Tmax为（116.53±1.17）h；阿尼西坦普通片的AΜC0-t为（434.53±102.69）μg/（min·ml），Cmax为（7.46±1.87）μg/ml，Tmax为（28.29±1.11）h。 结论 本实验建立的HPLC法，可以准确测定阿尼西坦体内代谢产物ABA的含量，适用于阿尼西坦缓释片在家兔体内的药代动力学研究。

[关键词] 阿尼西坦；N-对甲氧基苯甲酰氨基丁酸；反相高效液相色谱法；血药浓度；药代动力学

[中图分类号] R284.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）02（c）-0008-04

[Abstract] Objective To establish the determination method of N-anisoyl-GABA （ABA） content of metabolites in vivo for aniracetam sustained release tablet. Methods The content of ABA was determined by reversed-phase high performance liquid chromatography （RP-HPLC method）.Phenomenex ΜP-ODS C18 chromatographic column （250×4.6 mm，5 μm） was used and the mobile phase was set as acetonitrile∶0.1% acetic acid =25∶75，detection wavelength was set at 250 nm，and column temperature was 35℃. Results The blood sample were blow-dried by nitrogen at 40℃ （chloroform∶methyl alcohol=2∶8，vortex oscillation for 30 s and centrifugation for 10 min）.The result showed favorable linear relation in range of 67.5～2150 μg/L.The recovery rate was 86.67%-93.58%，meeting the experiment requirements of above 85%.The main pharmacokinetic parameters was as follows：the aniracetam sustained release tablet，AΜC0-t=（342.13±110.23） μg/（min·ml），Cmax=（7.41±2.05） μg/ml，and Tmax=（116.53±1.17） h；the aniracetam conventional tablet，AΜC0-t=（434.53±102.69） μg/（min·ml），Cmax=（7.46±1.87） μg/ml，and Tmax=（28.29±1.11） h. Conclusion HPLC method established in this study can accurately determine the ABA content of metabolites in vivo for aniracetam，which is applicable to pharmacokinetic study of aniracetam sustained release tablet in rabbits in vivo.

[Key words] Aniracetam；N-anisoyl-GABA；Reversed-phase high performance liquid chromatography；Blood concentration；Pharmacokinetics

阿尼西坦是1-（4-甲氧基苯甲酰基）2-吡咯烷酮，可用于神经保护和增强记忆。有研究证明，阿尼西坦可改善中老年人记忆力，降低阿尔茨海默病的发病率，因此备受临床关注[1]。阿尼西坦口服吸收后，血中达峰时间为20～40 min，生物半衰期为22 min，4 h后血药浓度已很难测出，其代谢产物以N-对甲氧基苯甲酰氨基丁酸（ABA）为主（约占70%），故采用反相HPLC法[2]，测定血液中ABA的浓度。本文旨在建立血浆中ABA血药浓度的反相HPLC法，并应用于家兔的阿尼西坦缓释片的药动学研究，为阿尼西坦缓释片的临床研究及开发提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260高效液相色谱仪（自动进样器、柱温箱、DAD检测器，美国安捷伦公司）；AB135-S型十万分之一电子天平（瑞士梅特勒一托利多公司）；……