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环介导等温扩增技术的改良及其在检测中的应用进展

2016-03-31蔡树东赵维芯成大荣朱善元顾玲玲扬州大学兽医学院江苏扬州5009江苏农牧科技职业学院江苏泰州500扬州大学旅游与烹饪学院江苏扬州5009

河南农业科学 2016年8期
关键词:检测方法

蔡树东,吴 双,赵维芯,成大荣,朱善元,顾玲玲(.扬州大学 兽医学院,江苏 扬州 5009; .江苏农牧科技职业学院,江苏 泰州 500; .扬州大学 旅游与烹饪学院,江苏 扬州 5009)

环介导等温扩增技术的改良及其在检测中的应用进展

蔡树东1,2,吴 双2*,赵维芯3,成大荣1,朱善元2,顾玲玲1
(1.扬州大学 兽医学院,江苏 扬州 225009; 2.江苏农牧科技职业学院,江苏 泰州 225300; 3.扬州大学 旅游与烹饪学院,江苏 扬州 225009)

环介导等温扩增(LAMP)技术是一种具有特异性强、灵敏度高、快速简便、扩增高效等优点的等温核酸扩增方法。近年来,该技术在许多方面得到了进一步的改进和发展,主要体现在多重LAMP技术的实现以及LAMP技术与其他技术的联合应用方面。对LAMP技术在细菌检测、病毒检测、寄生虫检测、真菌和支原体检测、动物胚胎性别鉴定、转基因食品检测以及肿瘤基因检测中的应用进展进行了综述,并对LAMP技术的应用前景进行了展望,为今后LAMP技术的发展及应用提供参考。

环介导等温扩增; 应用; 检测

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是Notomi等[1]发现的一种恒温核酸扩增技术,与传统的PCR技术相比,省去了PCR反应的变性、温度循环等一系列繁琐的过程,节省了反应时间,而且灵敏性比常规PCR高10倍以上。LAMP技术通过2对特异性引物对目的序列的6个区域退火杂交,利用BstDNA聚合酶的催化作用,在恒温条件下(60~65 ℃)温育30~60 min,实现对目标序列的批量扩增[2-5]。其反应结果可直接通过肉眼观察是否有白色焦磷酸镁沉淀产生进行判断,也可通过添加羟基萘酚蓝(HNB)、溴化乙淀(EB)、钙黄绿素或SYBR Green Ⅰ等荧光染料进行显色观察。……

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