程俊，曾晓荣，谭晓秋，李鹏云，文静，毛亮，杨艳

（医学电生理学教育部重点实验室，四川医科大学心血管医学研究所，四川泸州646000）

一种有效急性酶分离大鼠心肌细胞及复钙的方法*

程俊，曾晓荣，谭晓秋，李鹏云，文静，毛亮，杨艳

（医学电生理学教育部重点实验室，四川医科大学心血管医学研究所，四川泸州646000）

目的：本研究旨在探讨一种既简便又高效的急性酶分离大鼠心肌细胞及有效复钙的方法，拟建立一种稳定高效分离大鼠心肌细胞且复钙后细胞成活率高的方法，为进一步研究单个心肌细胞的各种生理机制等诸多实验提供有利的前提保障。方法：应用II型胶原酶于Langendorff灌流装置下进行恒压或恒流灌流，得到横纹清晰、立体感较强的大鼠心肌细胞，然后应用三步法对心肌细胞进行复钙。结果：应用Langendorff灌流系统对大鼠心脏进行恒压或恒流灌流II型胶原酶，成功得到横纹清晰、立体感较强的大鼠心肌细胞，且复钙后在台式液中存活率仍然高达50%。结论：成功建立了一种既简便高效又稳定的急性分离大鼠心肌细胞且复钙后心肌细胞成活率较高的方法，为今后研究大鼠心肌细胞舒缩功能及其基本生理特性提供良好的单个细胞。

大鼠；心肌细胞；Langendorff

急性分离单个大鼠心肌细胞常常应用于细胞收缩功能检测以及膜片钳实验记录心肌细胞上的各种通道电流等，但这些检测对单个心肌细胞的质量要求都非常高。运用酶解法分离单个心肌细胞时遇到的最大困扰是分离出的心肌细胞常常发生“钙反常”现象，刚刚分离下来的心肌细胞保存在正常台式液中恢复其生理钙离子浓度时，常常会发生大量皱缩及死亡[1-4]。……