林祥超，高志强，张鹤晓，张　康，郭金玉，牛建蕊，张乐萃（.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛6609；.北京出入境检验检疫局，北京通州0006；.北京森康生物技术开发有限公司，北京怀柔000；.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州70050）



猪圆环病毒2型ORF- 2全基因重组腺病毒的构建与鉴定

林祥超1，高志强2，张鹤晓2，张康3，郭金玉1，牛建蕊4，张乐萃1
（1.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109；2.北京出入境检验检疫局，北京通州100026；3.北京森康生物技术开发有限公司，北京怀柔101400；4.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州730050）

摘要：扩增猪圆环病毒2型的ORF-2全基因（702 bp），将目的片段与缺陷型腺病毒穿梭质粒pacAd5 CMV K-NpA连接，构建重组穿梭质粒CMV-ORF-2。将穿梭质粒与骨架质粒pacAd5 9.2-100经限制性内切酶Pac I线性化后共转染293T细胞，进行细胞内重组。7～15 d后获重组腺病毒rAd5 CMV-ORF-2与对照组重组腺病毒rAd5 CMV-GFP。使用293细胞进行病毒增殖，对增殖稳定的rAd5 CMV-ORF-2进行鉴定；rAd5 CMV-ORF-2 TCID50为107.5/50 μL，用该代次rAd5 CMV-ORF-2进行PCV-2阳性血清中和试验，结果表明，重组腺病毒成功，PCV-2阳性血清不能中和重组腺病毒。

关键词：猪圆环病毒2型；ORF-2；缺陷型重组腺病毒

猪圆环病毒（porcine circovirus，PCV），依据病毒的核酸序列差异可将病毒分为猪圆环病毒1型（PCV-1）和猪圆环病毒2型（PCV-2）。PCV-2是引发断奶仔猪多系统消耗综合征（post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS），猪皮炎与肾病综合征（porcine dermatitis and nephropathy syndrome，PDNS）等疾病的主要病原[1]。在PCV-2型的基因序列中ORF-1和ORF-2是两个主要阅读框。ORF-1编码的Rep蛋白与病毒的复制相关，ORF-2编码Cap蛋白，是PCV-2的主要结构蛋白，并具有特异性表位，能够刺激机体产生保护性抗体[2]。因此，PCV-2型的ORF-2 Cap蛋白被广泛研究应用于PCV-2型的检测与疫苗的研发[3]。……