王　婷，刘文华，邹　玲，张　灿，任慧英（青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109）



鼠疫菌素的克隆表达与活性分析

王婷，刘文华，邹玲，张灿，任慧英
（青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109）

摘要：为了研究鼠疫菌素的抑菌作用，PCR扩增并克隆鼠疫菌素（pst）基因，构建鼠疫菌素原核重组表达质粒pET28a-pst，在大肠杆菌BL21中表达。经His标签蛋白纯化柱纯化获得重组鼠疫菌素蛋白，并检测表达蛋白的抑菌活性。结果表明，鼠疫菌素基因长1 074 bp，重组鼠疫菌素为44 kD，以包涵体形式表达。纯化的鼠疫菌素对金黄色葡萄球菌ATCC25923和大肠杆菌O78具有一定的抑菌作用。研究结果将为进一步研究鼠疫菌素的应用奠定基础。

关键词：鼠疫菌素；克隆；原核表达；抑菌活性

Expression and Antibacterial Activity Analysis of Pesticin WANG Ting，LIU Wen-hua，ZOU Ling，ZHANG Can，REN Hui-ying

（College of Animal Science and Technology，Qingdao Agricultural University，Qingdao 266109，China）
Abstract：In order to investigate the antibacterial activity of pesticin（pst），pesticin gene was amplified by PCR and cloned into the prokaryotic expression plasmid pET28a-pst and expressed in BL21.The recombinant pesticin was purified with His-Tagged Protein Purification Kit and the antibacterial activity was analyzed .Our results showed that the full length of pesticin gene was 1 074 bp，and the recombinant pesticin was 44 kD.The antibacterial test results showed that purified pesticin had antibacterial activities against Staphylococcus aureu25923 and Escherichia.coli O78.
Key words：pesticin；cloning；prokaryotic expression；antibacterial activity
Corresponding authors：REN Hui-ying；ZHANG Can

细菌耐药性以及耐药菌感染是人医和兽医临床共同面临的一大难题。以大肠杆菌为例，全球每年因产肠毒素大肠杆菌（ETEC）引起的感染超过6.5亿例，并导致约80万例病人死亡[1]。据王占华报道[2]，分离自医院的854株大肠杆菌对氨苄西林的耐药率高达87%，对庆大霉素和美络西林的耐药率超过70%，对头孢哌酮和头孢噻吩的耐药率均超过50%。大肠杆菌引起的初生仔猪腹泻、鸡大肠杆菌性败血症是动物养殖中的常见病，其发病率在细菌病中居首位。从华北地区分离的鸡源大肠杆菌中84.76%对四环素耐药，70.12%对多西环素耐药[3]；猪肉中大肠杆菌可耐受的药物种类达8～11种，鸡肉中大肠杆菌对7～8种药物耐药[4]。尽管阿米卡星未被批准为兽药，但鸡肉源大肠杆菌对阿米卡星的耐药率达16.5%。……