张 哲

(牡丹江医学院医药研究中心,黑龙江 牡丹江 157011)



细胞存活和生长的检测方法探讨

张 哲

(牡丹江医学院医药研究中心,黑龙江 牡丹江 157011)

MTT是一种检测细胞存活和生长的方法。该技术现已广泛用于生物和医学等领域。基于此，针对该法进行探讨，以期与同行探讨，更好地推动生物医学的发展。

MTT法；细胞；检测

MTT是一种粉末状化学试剂，化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名为噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。其用途主要有两方面，包括药物(也包括其他处理方式如放射线照射)对体外培养细胞毒性的测定以及细胞增殖和细胞活性测定。该法在生物、医药等研究中具有重要作用[1-2]，鉴于此，以下针对该法进行深入探讨。

1 检测原理

活性细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死亡细胞则无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒，使用酶标仪在490 nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的数量值与细胞数成正比。根据测得的吸光度值，来判断活性细胞数量，吸光度值越大，表明细胞活性越强。若是测药物毒性，则表示药物毒性越小。

2 药品和仪器

MTT 配成的终质量浓度为5 mg/mL，须用PBS或生理盐水做溶剂。在配制和保存的过程中，容器应采用铝箔纸包住，确保其无菌。MTT甲瓒溶解液，二甲基亚砜和三联溶解液。酶标仪、分光光度计、倒置显微镜。

2 实验方法

2.1 细胞计数

使用胰酶消化对数期细胞，终止后离心收集，制成细胞悬液，细胞计数后调整其浓度。……