张 娜， 李江华*， 金 鹏， 堵国成， 陈 坚， 康 振

（1.江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡214122；2.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡214122）

阶段控温提高透明质酸酶在毕赤酵母中的表达

张 娜1，2， 李江华*1，2， 金 鹏1，2， 堵国成1，2， 陈 坚1，2， 康 振1，2

（1.江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡214122；2.江南大学 生物工程学院，江苏 无锡214122）

透明质酸酶（Hyalurondiase，HAase）是一种具有医药作用的水解酶，为了提高HAase在重组毕赤酵母中的分泌表达量，对重组毕赤酵母诱导阶段的温度进行了优化。研究发现，降低诱导温度可以提高HAase的产量，其中两阶段控制温度诱导策略效果最为显著。诱导阶段0~60 h温度控制在25℃，60~96 h温度控制在22℃，HAase酶活最高为1.18×106U/mL，是诱导温度为30℃时（4.53×105U/mL）的2.6倍。此外，采用两阶段控制温度诱导策略有利于细胞活性的提高和AOX1启动子的表达。两阶段控制温度诱导策略还可以应用到其他酵母表型中，为毕赤酵母高效表达外源蛋白质提供一种新思路。

透明质酸酶；毕赤酵母；两阶段控制温度；分泌表达

透明质酸酶（Hyalurondiase，HAase）是一种降解透明质酸的水解酶，广泛存在于动物组织与微生物中。根据HAase的作用机制，将其分为3大类[1]：第一类为内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶，作用于β-1，4-糖苷键，主要产物为四糖，主要来源于哺乳动物；第二类为内切-β-N-乙酰氨基葡糖苷酶，作用于β-1，4-糖苷键，通过β-消去机制得到4，5-不饱和双糖，主要来源于细菌；第三类为内切-β-葡糖苷酸酶，作用于β-1，3-糖苷键，主要来源于水蛭。目前市场上出售的HAase主要是从活体的牛和羊的睾丸组织中提取，存在杂蛋白质较多，纯度较低，免疫原性较强等问题。……