彭英云， 张 涛， 江 波*， 沐万孟， 缪 铭

（1.盐城工学院 海洋与生物工程学院，江苏 盐城 224003；2.食品科学与技术国家重点实验室，江南大学，江苏无锡214122）

Bacillus methylotrophicus γ-聚谷氨酸合成酶基因的克隆表达

彭英云1，2， 张 涛2， 江 波*2， 沐万孟2， 缪 铭2

（1.盐城工学院 海洋与生物工程学院，江苏 盐城 224003；2.食品科学与技术国家重点实验室，江南大学，江苏无锡214122）

研究了一株非谷氨酸依赖型γ-聚谷氨酸（poly-γ-glutamic acid，γ-PGA）产生菌Bacillus methylotrophicus SK19.001合成酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达。以pET-28a（+）载体构建含有pgsBCA合成酶基因的表达载体，转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21构建重组菌。结果表明，在分别以葡萄糖和谷氨酸为底物的培养基中，重组工程菌都具有合成γ-PGA的能力，说明pgsBCA合成酶基因对于B.methylotrophicus SK19.001产γ-PGA是必需的。pgsBCA合成酶基因序列比对的结果的表明，pgsB和pgsC基因编码的氨基酸序列相对保守。

Bacillus methylotrophicus；非谷氨酸依赖型；γ-聚谷氨酸合成酶；克隆表达

γ-聚谷氨酸（Poly-γ-Glutamate，γ-PGA）是一种多功能生物可降解高分子材料，相对分子质量一般在10 000~1 000 000左右[1]，通常由D-谷氨酸和L-谷氨酸通过酰胺键聚合而成。γ-PGA由于能被彻底生物降解，对环境无毒无害，又具有如良好的水溶性，超强的吸附性，可食用等独特性质，其在环保、农业、食品、医药、化工等领域具有广泛的应用前景，如作为土壤保水剂、食品增稠剂、污水絮凝剂、重金属吸附剂、药物或肥料缓释剂及药物载体等。γ-PGA目前多由微生物合成，根据培养基中是否需要谷氨酸，可以把γ-PGA产生菌分为谷氨酸依赖型菌株和非谷氨酸依赖型菌株，前者主要通过外源谷氨酸合成γ-PGA，后者则通过胞内合成途径将非谷氨酸底物如柠檬酸、葡萄糖等转化合成γ-PGA[2]。……